طراحي وكتور لنتي ويروسي بيان كننده ژن آپوپتين و تاثير سايتوتوكسيك آن در سلول هاي لوسمي لنفوبلاستيك حاد reh

Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating its Cytotoxic Effect on Reh Acute Lymphoblastic Leukemia Cells

مقاومت به داروهاي شيمي درماني يكي از مهمترين مشكلات درماني بيماران مبتلاء به لوسمي لنفوبلاستيك حاد (acute lymphoblastic leukemia) مي باشد. آپوپتين به دليل توانايي القاء اختصاصي آپوپتوز در سلول هاي توموري، پتانسيل انكار ناپذيري در درمان سرطان به خصوص مواردي كه به شيمي درماني پاسخ كمتري مي دهند، دارد. از اين رو، در اين مطالعه اثر القاء بيان آپوپتين را در القاء مرگ سلولي در لنفوبلاست هاي بدخيم رده سلولي reh مورد بررسي قرار گرفت.مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، بعد از كشت سلول هاي reh (تهيه شده از انستيتو پاستور) ميزان ورود وكتور لنتي ويروسي، فعاليت متابوليك و قدرت تكثير سلول ها به ترتيب با استفاده از فلوسايتومتري، mtt و تريپان بلو در ساعت هاي 24، 48، 72 و 96 بررسي شد. همچنين جهت بررسي ميزان بيان ژن آپوپتين از real time pcr استفاده شد.يافته ها: نتايج حاصل از اين پژوهش نشان دهنده طراحي و ساخت مناسب وكتور لنتي ويروسي است كه توانسته بيش از 65% سلول ها را آلوده كند. همچنين پس از آلوده كردن سلول ها با وكتور، ميزان بيان ژن آپوپتين حدود 10 برابر نسبت به كنترل افزايش يافته و به دنبال آن درصد زنده ماني سلول ها به طور وابسته به زمان تا 53% كاهش يافت (0/01>p). همچنين نتايج، نشان دهنده تاثير مهاري بيان ژن آپوپتين بر فعاليت متابوليك سلول هاي reh تا 35% بود (0/01>p).نتيجه گيري: نتايج مطالعه نشان داد كه بيان ژن آپوپتين داراي فعاليت ضد توموري بروي سلول هاي reh بوده و مي تواند به عنوان درماني اميدبخش در all استفاده گردد.

Resistance to chemotherapy drugs is one of the most important treatment problems in patients with acute lymphoblastic leukemia. Apoptin due to its ability to induce apoptosis in tumor cells, has an undeniable potential in cancer treatment, especially those that respond lessly to chemotherapy. Therefore, in this study, the effect of induction of apoptin expression on induction of cell death in reh malignant lymphoblasts was investigated. METHODS: In this experimental study, after culturing of Reh cells (prepared by the Pasteur Institute), the entry of lentiviral vector, metabolic activity and cell proliferation were measured using flow cytometry, MTT and trypan blue at 24, 48, 72 and 96 hours. Real time PCR was also used to determine the apoptin gene expression. FINDINGS: The results of this study indicate the design and construction of a suitable lentiviral vector that can infect more than 65% of the cells. Also, after infecting the cells with the vector, the apoptin gene expression rate was increased about 10 times to control, and subsequently, the cell viability decreased by 53% time-dependently (p <0.01) . The results also showed that the inhibitory effect of apoptin gene expression on the metabolic activity of Reh cells was about 35% (p<0.01). CONCLUSION: The results of the study showed that apoptin gene expression has anti-tumor activity in Reh cells and can be used as a promising therapy in ALL.