بررسي تاثير miR-146a-5p در ميزان بيان ژن MMP9 در رده سلول سرطان كولوركتال

Investigation of the Effect of miR-146a-5p on Expression of MMP9 Gene in Colorectal Cancer Cell Line : HT-29

زمينه و هدف: سرطان كولوركتال سومين دليل مرگ و مير ناشي از سرطان در سراسر جهان است. miRNA ها، گروهي از RNA هاي كوچك غير كد‌كننده ميباشند كه باعث مهار ترجمه mRNA هدف ميشوند. miR-146a-5p به عنوان تومور ساپرسور ميباشد كه بيان نابجاي آن در بسياري از سرطان ها نشان داده شده است. در اين مطالعه كه يك مطالعه بنيادي و پايه بود، هدف بازگرداني سطح بيان miR-146a-5p به حد طبيعي و بررسي تاثير آن بر بيان ژن MMP9 در سلولهاي HT-29 بود. روش كار: ابتدا رده سلولي HT-29 از سرطان كولوركتال در محيط كشت RPMI-1640 كشت داده شد. سپس miR-146a-5p توسط معرف Jet-PEI ترانسفكت گرديده و با استفاده از تكنيك q­RT­-PCR بيان miR-146a-5p و ژن­ MMP9 در سلول هاي HT-29 ترانسفكت شده با miR-146a-5p و كنترل ارزيابي گرديد. تجزيه و تحليل داده ها با استفاده از نرم افزار آماري GraphPad Prism 6 انجام گرفت. يافته ها: بر اساس داده هاي به دست آمده، آغاز مسيرهاي تهاجم و متاستاز مي‫تواند ناشي از كاهش بيان miR-146a-5p به طور خاص، در مرحله آخر بيماري سرطان كولوركتال باشد. نتايج تست q­RT­-PCR كه براي بررسي بيان ژن‫ها انجام شد، نشان داد كه miR-146a-5p باعث كاهش بيان ژن MMP9 در گروه ترانسفكت شده با miR-146a-5p در مقايسه با گروه كنترل مي‫شود. نتيجه گيري: بر اساس اين مطالعه فعال شدن مسيرهاي متاستاز، ناشي از كاهش بيان miR-146a-5p مي‫باشد. بر اين اساس miR-146a-5p مي‫تواند باعث مهار مهاجرت سلولي در شرايط آزمايشگاهي از طريق كاهش بيان ژن هاي درگير در متاستاز از جمله MMP9 شود. بنابراين miR-146a-5p مي‫تواند بعنوان يك بيوماركر تشخيصي و هدف درماني جديد براي درمان سرطان كولوركتال معرفي گردد.

Backgrounds & objectives: Colorectal cancer (CRC) is the third leading cause of cancer death worldwide. Micro RNAs are a group of non-coding small RNAs that inhibit the translation of target mRNA. MiR-146a-5p, as a tumor suppressor, has abnormal expression in many cancers. In this basic research, our goal was to restore the expression level of miR-146a-5p to normal level and to investigate its effect on the expression of the MMP9 gene in HT-29 cells. Methods: this study evaluates the effect of transfection of miR-146a-5p in HT-29 cell line. At first, the HT-29 cell line from colorectal cancer was cultured in RPMI-1640 culture media and then were transfected with miR-146a-5p using Jet-PEI reagent. qRT-PCR technique was employed to evaluate the expression level of miR-146a-5p and MMP9 genes. The statistical analysis was performed using GraphPad Prism 6 software. Results: According to the obtained data, the onset of the invasion and metastasis, in particular, at the final stage of colorectal cancer may be related to a reduction in the expression of miR-146a-5p. The results of the qrRT-PCR test showed that by increasing the expression level of miR-146a-5p in HT-29 cells, the expression level of MMP9 gene decreased in the miR-146a-5p transfected group compared to the control group. Conclusions: According to this study, activation of metastatic pathways was due to the down regulation of miR146a-5p. Accordingly, miR-146a-5p can inhibits migration of these cells through down-regulating the expression of metastasis-related genes. Hence, miR-146a-5p can be a new diagnostic biomarker and new therapeutic target for CRC.