كليدواژه :
استافيلوكوكوس اورئوس , واكنش زنجيره‌اي پليمراز , ژنوتيپ , پژوهش‌هاي مقطعي , كواگولاز
چكيده فارسي :
زمينه و هدف: استافيلوكوكوس اورئوس از عوامل بيماري‌زاي متداول در انسان است كه طيف گسترده‌اي از بيماري‌ها را ايجاد مي‌كند. آنزيم كوآگولاز از عوامل مهم بيماري‌زاي اين باكتري مي‌باشد. همچنين بررسي تنوع ژنتيكي ژن كدكننده اين آنزيم (Coa) يكي از روش‌هاي مولكولي تعيين تيپ ايزوله‌هاي استافيلوكوكوس اورئوس مي‌باشد.
روش بررسي: در اين مطالعه مقطعي، از اسفند 1396 تا مهر 1397، 150 نمونه استافيلوكوس اورئوس جدا شده از نمونه‌هاي ادرار و خون از بيمارستان‌هاي آموزشي الزهرا و امام حسين (ع) دانشگاه علوم پزشكي اصفهان مورد مطالعه قرار گرفتند. پس از تاييد نوع باكتري نمونه با قطعه ژنومي Coa، براي تعيين تيپ كوآگولاز منطقه بسيار متغير ژن اين آنزيم در واكنش Polymerase chain reaction (PCR) تكثير و سپس مورد هضم آنزيمي با استفاده از آنزيم اندونوكلئاز محدودگر AluI قرار گرفت و تنوع طول قطعات هضم آنزيمي مورد بررسي قرار گرفت.
يافته‌ها: از 150 نمونه 45 نمونه استافيلوكوكوس اورئوس با تست‌هاي بيوشيميايي تاييد و از اين تعداد 36 (80%) نمونه‌ها حامل ژن كوآگولاز بودند. در بين الگوهاي PCR، الگوي bp680 در 20 نمونه و الگوي bp750 در 16 نمونه به‌دست آمدند. پس از هضم آنزيمي براي آزمون Restriction fragment length polymorphism (RFLP)، چهار الگو به‌دست آمدند كه الگوي 280+400 در 16 نمونه (44/4%)، الگوي 280+470 در 7 نمونه (19/4%)، الگوي 340+340 در 6 نمونه (16/6%)، الگوي بدون هضم 750 در 7 نمونه (19/6%) مي‌باشند.
نتيجه‌گيري: با استفاده از آزمايشات صورت گرفته مشخص گرديد كه الگوي PCR-RFLP، 280+400 جفت بازي الگوي غالب در نمونه‌هاي استافيلوكوكوس اورئوس جدا شده در اصفهان مي‌باشد.
چكيده لاتين :
Background: Staphylococcus aureus is a common pathogen in human that can be the cause of a wide range of infectious diseases including bacteremia, pneumonia, cellulitis, and osteomyelitis and skin and soft tissue infections. The coagulase enzyme is one of the most important virulence factors of this bacterium. The polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) Coa pattern is one of the molecular base typing methods. Molecular typing plays an important role in epidemiological studies of nosocomial infection, such as methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) infection. The PCR-RFLP Coa gene technique provides a useful preliminary method to monitor variations in MRSA populations. We were done Coa-RFLP typing according to the method of Hookey et al., with some modifications.
Methods: In this cross-sectional study, one-hundred fifty isolates of S. aureus from urine and blood samples of patients that collected from educational hospitals of Imam Hossein and Al Zahra Isfahan University of Medical Sciences, Iran, from February 2018 to October 2018 were analyzed. After bacterial confirmation of isolates by Coa gene in polymerase chain reaction (PCR) technique, to perform coagulase gene typing, the repeated units encoding hypervariable regions of the coagulase gene of S. aureus were amplified by PCR. This was followed by AluI restriction enzyme digestion and analysis of restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns.
Results: Of 150 samples, 45 isolated of S. aureus were confirmed by biochemical methods. Of previous positive samples, 36 (80%) isolates carried Coa gene. Two different genotypes of Coa gene were obtained that include bp680 fragment in 20 specimens and bp750 fragment in 16 specimens. After enzymatic digestion by AluI restriction enzyme for RFLP, four different restriction patterns were obtained that including, the 280+400 pattern in 16 specimens (44.4%), 280+470 pattern in 7 specimens (19.4%), 340+340 pattern in 6 specimens (16.6%) and 750 patterns without digestion were in 7 specimens (19.6%).
Conclusion: Using the present experiments, it was determined that the PCR-RFLP pattern, 280+400, was the dominant pattern in the Staphylococcus aureus samples isolated in Isfahan.
