عنوان مقاله :
كلونينگ، بيان، تخليص و بررسي وضعيت ايمنوتراپي پروتئين كايمريك TGFαL3-SEB در درمان سرطان پستان
عنوان به زبان ديگر :
Cloning, expression, purification and the study of immunotherapy status of TGFαL3-SEB chimeric protein in breast cancer treatment
پديد آورندگان :
يوسفي، فروغ دانشگاه علوم پزشكي بوشهر - دانشكذه پزشكي - بخش ميكروب شناسي و انگل شناسي , سيادت، داور انستيتو پاستور ايران - گروه سل و تحقيقات ريوي , اصلاني، محمدمهدي انستيتو پاستور ايران - بخش باكتري شناسي , نصيري، اميد انستيتو پاستور ايران - بخش باكتري شناسي , موسوي، فضل الله انستيتو پاستور ايران - بخش باكتري شناسي , ايماني فولادي، عباس علي مركز تحقيقات ميكروبيولوژي كاربردي - دانشگاه علوم پزشكي بقيه الله، تهران
كليدواژه :
انتروتوكسين تيپ B , استافيلوكوكوس اورئوس , كلونينگ , ايمنوتراپي , فاكتورα رشد اپيدرمي , سرطان پستان
چكيده فارسي :
زمينه و هدف: سوپرآنتي ژن هاي باكتريايي قادرند لنفوسيت هاي T را بدون توجه به اختصاصي بودن آنها تحريك كرده و سبب آزادسازي حجم وسيعي از سايتوكاين ها، از لنفوسيت هاي T و مونوسيت ها گردند در نتيجه آنها مي توانند سيستم ايمني بيمار را در جهت از بين بردن سلول هاي سرطاني فعال كنند. در اين مطالعه براي اولين بار پروتئين كايمريك TGFαL3-SEB از طريق اتصال ناحيه سوم فاكتور رشد اپيدرمي به انتروتوكسين تيپ B استافيلوكوكوس اورئوس طراحي و توليد گرديد. بعلاوه فعاليت ضد توموري آن بر عليه رده سلول سرطان پستان انساني مورد ارزيابي قرار گرفت.
روش ها: پروتئين كايمريك TGFαL3-SEB از طريق اتصال ژنتيكي انتهاي آميني tgfαl3 به انتهاي كربوكسي seb با واسطه لينكر GGSGSGGG طراحي شد. حامل نوتركيب pET28a::tgfαl3-seb به ميزبان بياني اشرشياكولي (BL21(DE3 منتقل و به صورت يك پروتئين كايمريك بيان گرديد. سپس فعاليت ضد توموري پروتئين كايمريك TGFαL3-SEB بر روي رده سلولي سرطان پستان انساني مورد ارزيابي قرار گرفت.
نتايج: يافته هاي حاصله از طريق colony PCR، هضم آنزيمي و تعيين توالي تاييد شد. پروتئين كايمريك با وزن مولكولي kDa 31 بيان، تخليص و سپس از طريق آناليز وسترن بلات تاييد گرديد. بررسي اثر ضدتوموري نشان داد. TGFαL3-SEB قادر است رشد سلولهاي سرطان پستان را مهار كند.
نتيجه گيري: نتايج نشان داد كه پروتئين كايمريك TGFαL3-SEB با موفقيت طراحي، بيان و تخليص گرديده و احتمالا ميتواند به عنوان كانديد انتخابي ايمنوتراپي سرطان پستان مورد استفاده قرار گيرد
چكيده لاتين :
Background & Aim: Bacterial superantigens, stimulate polyclonal T cells
irrespective of their antigen specificity, resulting in a massive release of cytokines
from T cells and monocytes, and suggest that that they could be candidates of
new antitumor agents. Recent attempts have been done to specifically target
superantigens towards tumors. Here, we evaluate TGFαL3-SEB fusion protein as
a new antitumor candidate by genetically fusing the third loop of transforming
growth factor alpha (TGFalphaL3) to staphylococcal enterotoxin type B.
Methods: Recombinant TGFαL3-SEB sequence was constructed by fusing the Nterminal of tgfαl3 and C-terminal of seb using hydrophobic GGSGSGGG amino
acid linker. In this study, gene coding for the SEB superantigen was amplified.
The PCR product containing the seb gene was digested by EcoRI and HindIII and
cloned in pET28a expression vector. Then the synthetic tgfα-linker sequence was
digested by BamHI and EcoRI and cloned in pET28::seb vector. The recombinant
pET28:tgfαl3-seb transformed into E. coli BL21(DE3). Expression of
recombinant protein was examined by SDS-PAGE and western blotting. In vitro
antitumor activity against MDA-MB-468, human breast cancer cells expressing
EGFR, was evaluated.
Results: Cloning of tgfαl3-seb was confirmed by colony-PCR, enzymatic
digestion and sequencing. The recombinant TGFαL3-SEB fusion protein with
molecular weights of 31kDa was expressed and confirmed by anti-his westernblot analysis. The TGFaL3-SEB chimeric protein exhibited potent in vitro
antitumor activity.
Conclusion: Our findings indicated that TGFαL3-SEB fusion protein can be
successfully constructed expressed and purified and may serve as a useful
antitumor candidate for breast cancer immunotherapy.
عنوان نشريه :
فصلنامه دانشگاه علوم پزشكي تربت حيدريه
