مقايسه تيتر آنتي بادي توليد شده بر عليه پروتئين‌ هاي نوتركيب BLF1 و BLF1-STxB در رت‌ هاي آزمايشگاهي

Comparison of the Titers of Produced Antibodies against BLF1 and BLF1-STxB Recombinant Proteins in Laboratory Rats

باكتري بورخولدريا­سودومالئي عامل بيماري ميلوئيدوزيس و باكتري شيگلا­ديسانتري شايع ­ترين عامل اسهال است و تاكنون هيچ واكسن موثري عليه اين دو باكتري توليد نشده است. پروتئين BLF1 باكتري بورخولدريا سودومالئي نقش مهمي در ايجاد بيماري ­زايي و عفونت دارد. STxB شيگلا­ديسانتري يكي از فاكتورهاي مهم در بيماري ­زايي است و هم چنين داراي نقش ياوري و حاملي است. تركيب پروتئين BLF1 با STxB مي ­تواند كانديداي مناسبي براي واكسن باشد. در اين مطالعه تيتر آنتي ­بادي پروتئين ­هاي BLF1-STxB وBLF1 در رت با يكديگر مقايسه شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي وكتورهاي pET28a(+)-blf1-stxB و pET28a(+)-blf1 به باكتري BL21(DE3) E. coli تراريخت و توسط PCR تاييد شدند. بيان ژن ­هاي blf1-stxB و blf1 تحت القاي Isopropyl-β-D-thiogalactoside انجام و بعد از تخليص پروتئين با استفاده از ستون كروماتوگرافي تمايلي، پروتئين ­هاي حاصل در چهار نوبت به رت تزريق شد. آنتي بادي پلي كلونال توليد شده در سرم رت ­ها اندازه گيري شد. يافته ­هاي پژوهش: پروتئين ­هاي نوتركيب توليد شده به وسيله SDS-PAGE و لكه ­گذاري وسترن مورد تاييد قرار گرفتند. نتايج الايزا نشان داد كه آنتي ­بادي عليه آنتي ژن BLF1 توليد شده و با تركيب STxB با BLF1 ميزان تيتر آنتي بادي نسبت به تيتر آنتي بادي عليه آنتي ژن BLF1 افزايش يافته است. بحث و نتيجه گيري: پروتئين BLF1-STxB تيتر آنتي بادي بيشتري نسبت به BLF1 داشت. به علت شباهت ساختاري زير واحد STxB با همتاي آن در باكتري اشرشياكلي مي ­تواند كانديداي واكسن عليه بورخولدريا سودومالئي، شيگلا ديسانتري، باكتري اشرشياكلي انتروهموراژيك(EHEC) و اشرشيا انترو توكسينوژنيك(ETEC) باشد.

Burkholderia pseudomallei causing Melioidosis and Shigella dysenteriae is the most common cause of diarrhea, and so far no effective vaccine has been produced against these two bacteria. The BLF1 protein of Burkholderia pseudomallei bacteria plays an important role in pathogenesis and infection. Shigella dysentery STxB is one of the most important factors in pathogenesis and also has an adjuvant role. Binding the BLF1 protein with STxB can be a good candidate vaccine. In this study, the antibody titers of BLF1-STxB and BLF1 proteins produced in rats were compared. Materials & Methods: In this experimental study, pET28a (+) - blf1-stxB and pET28a (+) - blf1 vectors were transformed into E. coli BL21 (DE3) and confirmed by PCR. The expression of blf1-stxB and blf1 genes was induced by IPTG and the proteins were injected into rats four times after purification of the protein by using an affinity chromatography column. Polyclonal antibodies produced in the serum of rats were measured. The produced recombinant proteins were approved by SDS-PAGE and Western blotting. ELISA results showed that antibody was produced against the BLF1 antigen and the antibody titer level increased by STxB binding to BLF1, compared with the antibody titer against the BLF1 antigen. Discussion & Conclusions: The BLF1-STxB protein had higher antibody titer than BLF1. Due to the structural similarity of STxB subunit with its counterpart in E. coli, it can be a vaccine candidate against Burkholderia pseudomallei, Shigella dysenteriae, enterohemorrhagic E. coli, and enterotoxigenic E. coli.