بررسي ارتباط بين تغييرات بيان LncRNA THRIL كنترل‌كننده مسير TNF-alpha در رده سلولي گليوبلاستوماي تحت تيمار با تموزولاميد

Relationship between LncRNA THRIL expression controlling TNF- pathway in glioblastoma cell line under temozolomide treatment

زمينه و هدف: گليوما، شايع‌ترين و كشنده‌ترين تومور بدخيم مغزي است. LncRNA THRIL، از نوع آنتي سنس و واسطه مهم مسير سيگنالي NF-KB، كه در بافت‌ها از جمله سيستم عصبي مركزي بيان مي‌گردد. بخش عمده فرآورده بيان ژن را LncRNA تشكيل مي‌دهد. هدف مطالعه، بررسي تغييرات ميزان بيان LncRNA THRIL در آدنوكارسينوماي گليوبلاستوما، رده سلولي T98G تحت تيمار با داروي شيمي‌درماني تموزولاميد بود. روش بررسي: مطالعه كنوني از نوع مورد-شاهدي از فروردين تا شهريور 1396 در مركز علوم تحقيقات دانشگاه آزاد اسلامي زنجان انجام شده است. رده سلولي T98G در غلظت‌هاي متفاوت داروي تموزولاميد (25، 50 و μM 100) و در زمان‌هاي مختلف (24، 48 و 72 ساعت) تيمار شده، به‌ترتيب استخراج RNA و سنتز cDNA انجام شد. سپس بيان ژن LncRNA THRIL توسط Real-time PCR مورد ارزيابي قرار گرفت و نتايج توسط روش كميت‌سنجي نسبي و روش ليواك (Livak method) آناليز گرديد. يافته‌ها: بيان ژن THRIL در زمان 24 ساعت در غلظت‌هاي 25 و μM 100 (0/001P<) كاهش معنادار مشاهده گرديد. زمان 48 ساعت در غلظت μM 50 (001/0P<) به استثناي غلظت 25 و μM 100 (0/001P<) افزايش معنادار مشاهده گرديد. زمان 72 ساعت در غلظت μM 50 (0/001P<) افزايش معنادار داشته است و در مقابل، غلظت‌هاي 25 و μM 100 (0/001P<) نشان‌دهنده كاهش بيان ژن THRIL بوده‌اند. نتيجه‌گيري: در نتيجه، تغييرات بيان ژن THRIL پس از تيمار، به زمان و غلظت دارو وابسته است و در غلظت μM 50 و زمان 48 ساعت بالاترين تاثير بر سلول با توجه به بيان ژن داشته است.

Background: Glioma is one of the most common and deadliest primary malignant tumors in the brain. A large part of the gene expression products are non-coding protein RNA. LncRNA THRIL gene is an antisense LncRNA and one of the most important mediators of the NF-KB signaling pathway, that express in many tissues of the body, including the central nerve system (CNS). The aim of the present study was to investigate the alternation in the expression of LncRNA THRIL gene in cells of the adenocarcinoma glioblastoma T98G cell line ,under treatment with temozolomide chemotherapy drug. Methods: This case-control study was conducted in Research Center of Islamic Azad University of Zanjan, Iran, from April to September 2017. Cells of T98G cell line was treated with various doses of temozolomide chemotherapy drug (25-50-100 μM) and at different times (72-48-48 hours), Respectively RNA extraction and cDNA synthesis were performed. Then LncRNA THRIL gene expression was studied by real-time PCR method and the results were analyzed by relative quantitative and livak methods. Results: The THRIL gene expression in 24 hours’ time with 25 and 100 μM doses (P< 0.001) had significant decreased expression and 50 μM dose had non-significant increase. It had significant increase in 48 hours time with 50 μM dose (P< 0.001), except 25 μM (P< 0.001) and 100 μM (P< 0.001) doses had significant decreased expression. It had significant increase during 72 hours time with 50 μM dose (P< 0.001), in contrast 25 μM (P> 0.001) and 100 μM (P< 0.001) concentrations of temozolomide chemotherapy drug demonstrated decreased expression of the LncRNA THRIL gene (P< 0.001). Conclusion: As a result, the THRIL gene expression alterations after cancer cells treatment by temozolomide chemotherapy drug depends on the time and dose of the drug and the 48 hours treatment time with 50 μM dose (P< 0.001) had the highest effect on cancer cells of the T98G cell line, due to the expression of the THRIL gene.