طراحي و ساخت وكتور بياني حاوي آنتي ژن كايمريك Omp25-Omp31 بروسلا مليتنسيس با هدف توليد واكسن نوتركيب عليه بيماري بروسلوز

زمينه: بروسلوز يا تب مالت (تب مديترانه اي) به واسطه رشد و تكثير باكتري كوكوباسيل گرم منفي بروسلا در سلول هاي پستانداران رخ مي دهد. اين بيماري به عنوان يك بيماري مشترك بين انسان و دام شناخته شده است. تا به حال 6 گونه بروسلا شناسايي شده اند بطوريكه مهمترين آنها كه در انسان ايجاد بيماري مي كند، بروسلا مليتنسيس مي باشد. اولين قدم در رسيدن به واكسن نوتركيب انتخاب بهترين آنتي ژن هايي است كه بيشترين نقش را در ايجاد بالاترين سطح ايمني داشته باشد.روش‌ كار: اين پژوهش با هدف خالص سازي دو عدد از بهترين آنتي ژن هاي محرك بيماري بروسلوز و ساخت كايمر تركيبي متشكل از اين دو آنتي ژن، بواسطه جداسازي و كلونينگ آنتي ژن هاي Omp31 وOmp25 از باكتري كوكوباسيل بروسلا و هم چنين انجام فعاليت هاي بيوانفورماتيك و تهيه وكتور بياني كايمر شده از اين آنتي ژن ها و كايمر ساخته شده آنها، توسط روش هاي مهندسي ژنتيك با هدف توليد واكسن نوتركيب به منظور پيشگيري از اين بيماري خواهد بود.يافته‌ها: توالي هاي آنتي ژني مورد نظر با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي تكثير و توالي يابي شدند. عمل اتصال و توليد كايمر دو آنتي ژن با استفاده از لينكر EAAAK)2) بدون وجود جهش و تغيير در ساختار پروتئين آن انجام شد. قطعه كايمر ساخته شده مورد نظر به داخل ميزبان بياني BL21 (DE3) بعد از عمل كلون، در وكتور بياني Pet32 a انتقال داده شد.نتيجه‌ گيري: امكان اتصال دو آنتي ژن با لينكر مورد نظر بدون جهش وجود داشت. و علاوه بر آن امكان انتقال توالي كايمري ساخته شده به درون وكتور بياني و ميزبان بياني امكان پذير بود. علاوه بر اين نتايج بيوانفورماتيكي درخت فيلوژنتيكي نشان داد كه سويه مليتنسيس Rev1 بيشترين همولوژي را براي آنتي ژن Omp25 با سويه مليتنسيس M16 و همچنين بيشترين همولوژي را در بررسي ها براي آنتي ژن Omp31 بعد از مليتينسيس با گونه بروسلا Ovis دارا مي باشد.