جداسازي و شناسايي باكتري هاي نمكدوست توليد كننده آنزيم هاي هيدرولايتيك جداسازي شده از مركز ايران

Isolation and identification of hydrolytic enzymes generated by halophilic bacteria in center of Iran

زمينه يكي از منابع مهم براي توليد آنزيم‌ها باكتري‌ها هستند. مطالعه اخير با هدف جداسازي و غربالگري مولكولي باكتري‌هاي نمك‌دوست توليد كننده آنزيم‌هاي آميلاز، ليپاز و پكتيناز از خاك شور مركز ايران انجام گرفته است. روش‌كار در اين مطالعه از خاك شور حاج علي گول و بيارجمند استان سمنان نمونه‌برداري شد. جهت جداسازي باكتري‌هاي مولد آميلاز، ليپاز و پكتيناز از محيط كشت اختصاصي هركدام از آنزيم‌ها استفاده شد. فعاليت آنزيمي باكتري‌ها براساس تشكيل هاله شفاف يا ايجاد رسوب در اطراف كلني‌ها پس از اضافه كردن معرف‌هاي مربوطه مشخص گرديد. جدايه‌ها با فعاليت آنزيمي آميلازي، ليپازي و پكتينازي با استفاده از روش تعيين توالي16S rRNA شناسايي شدند. يافته‌ها از هفت نمونه باكتري جدا شده از خاك، 4 باكتري با فعاليت آميلاز، 6 باكتري با فعاليت ليپازي و 3 باكتري با فعاليت پكتينازي جداسازي و شناسايي گرديدند. از اين بين دو جدايه، هر سه نوع آنزيم را توليد مي‌كند كه بررسي‌هاي مولكولي اين دو جدايه متعلق به جنسBacillus است. از طرف ديگر باكتري‌هاي نمك‌دوست توليد كننده آنزيم‌هاي آميلاز و پكتيناز متعلق به جنس‌هاي Bacillus و Halobacillus و باكتري‌هاي توليد كننده ليپاز متعلق به جنس‌هاي Virgibacillus و Bacillus بودند. نتيجه‌گيري نتايج حاصل از پژوهش نشان داد كه باكتري‌هاي باسيلوس جداشده از خاك قادر به توليد هر سه آنزيم آميلاز، پكتيناز و ليپاز هستند.

Background Bacteria are one of the important sources of producing enzymes. The aim of this study was to the isolate the halophilic bacteria producing amylase, lipase and pectinase from saline soil of the center of Iran. Methods In this study, soil samples were collected from Dagh Biarjmand and Haj Aligholi in Semnan province. At first, isolated halophilic bacteria were cultured and screened for producing of hydrolytic enzymes including amylase, lipase and pectinase using enzyme-specific media. The enzymatic activities of isolates were recognized by induction of growth inhibition zone and/or precipitation around colonies after addition of related indicators. Afterward, enzyme positive isolates were identifies using the 16S rRNA sequencing. Results Out of 7 bacterial isolates, 4 bacteria with amylase activity, 6 bacteria with lipase activity and 3 bacteria with pectinase activity were recognized and identified. Results showed that 2 isolates with the ability of producing all three types of enzymes belong to Bacillus genus using molecular identification methods. Furthermore, the halophilic bacteria producing amylase and pectinase were belonging to Bacillus and Halobacillus genera. Besides, bacteria producing lipase belonged to Bacillus and Virgibacillus genera. Conclusion The Bacillus bacteria isolated from the soil can produce all three amylase, pectinase and lipase enzymes.