ارزيابي تأثير مواد افزودني شيميايي در تاخوردگي مجدد فاكتور رشد اندوتليال عروقي نوتركيب

The Effect of Chemical Additives in Refolding of Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor

زمينه و هدف: مهم‌ترين مشكل توليد پروتئين‌هاي نوتركيب در سلول‌هاي پروكاريوتيك، اختلال در عملكرد اين پروتئين‌ها به دليل تغيير ساختار طبيعي آن‌هاست. هدف اين مطالعه انتخاب بهترين مواد شيميايي به عنوان تركيبات مكمل بافر دياليز، جهت اصلاح ساختار فضايي فاكتور رشد اندوتليال عروقي (VEGF) نوتركيب است. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، با بهره‌گيري از نرم‌افزارها، مواد شيميايي مكمل مختلف انتخاب شدند. با افزودن اين تركيبات به بافر دياليز VEGF نوتركيب، عملكرد اين مواد در تاخوردگي مجدد پروتئين نوتركيب و ايجاد تمايز در سلول‌هاي پايه مزانشيمال به سلول‌هاي اندوتليال، با روش فلوسايتومتري، ارزيابي شد. ملاحظات اخلاقي: اين مطالعه با شناسه ARAKMU. REC.1394.199، در كميته پژوهشي دانشگاه علوم‌پزشكي اراك، به ثبت رسيده است. يافته ها: نتايج نشان داد كه اضافه‌كردن آرژنين، سيستئين و DDT، باعث افزايش تمايز سلول‌هاي مزانشيمال به اندوتليال مي‌شود. با حضور آرژنين، سيستئين، DDT و NaCl، در بافر دياليز، ميزان شاخص‌هاي تمايزي اختصاصي (CD) مربوط به سلول‌هاي اندوتليال (CD31/144)، در بالاترين ميزان بود. نتيجه گيري: حضورآرژنين، سيستئين، DDT و NaCl در بافر دياليز VEGF نوتركيب، بيشترين تأثير را در تمايز سلول مزانشيمال به اندوتليال دارد.

Background and Aim The most important problem in the production of recombinant proteins in prokaryotic cells is the disruption of the function of these proteins due to their altered natural structure. The aim of present study is to identify the best chemicals dialysis buffer additives in order to improve the protein structure of recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) Methods & Materials In this experimental study, different chemicals additives were selected using relevant software. After adding these additives to the recombinant VEGF dialysis buffer, their effect on the refolding of recombinant proteins and the differentiation of mesenchymal stem cells into endothelial cells was assessed by flow cytometry method. Ethical Considerations This study obtained its ethical approval from the Research Ethics Committee of Arak University of Medical Sciences (Code: ARAKMU. REC.1394.199). Results : The results showed that the addition of arginine, cysteine and dithiothreitol (DTT) to dialysis buffer increases the differentiation of mesenchymal stem cells into endothelial cells. With the presence of sodium chloride (NaCl), cysteine, arginine and DTT in treated cells, the rate of specific Cluster Differentiation (CD) markers of endothelial cell (CD31/144) was at the highest level. Conclusion Adding cysteine, arginine, DTT and NaCl to the dialysis buffer of recombinant VEGF had the greatest effect on the mesenchymal cell differentiation into endothelial cells.