معرفي ژن¬هاي مرجع براي تجزيه و تحليل يافته‌هاي RT-qPCR در اسپرم منجمد نريان

انجماد اسپرم موجب پيشرفت¬هاي زيادي در صنعت پرورش حيوانات اهلي به¬خصوص از لحاظ انتشار ژن¬هاي برتر شده است و بهبود نگه¬دارنده¬ها مي¬تواند موجب افزايش قابل ملاحظه¬اي در انتقال و تلقيح اسپرم¬هاي منجمد شود. در اين مطالعه، ژن‌هايي ارزيابي شدند كه حتماً در اسپرم منجمد شده نريان بيان مي¬شوند و با فراهم كردن تكثيري مناسب، به عنوان ژن¬هاي مرجع در مطالعات آينده¬ بيان ژن استفاده شوند. براي اين منظور اسپرم¬هاي زنده و با تحرك بالاي 70 درصد، از نمونه¬هاي تهيه شده از شش نريان مختلف انتخاب شدند. نمونه¬هاي اسپرم براي استخراج محتوي كل mRNA به دو بخش تقسيم شدند، يكي به عنوان نمونه تازه و ديگري پس از انجماد و ذوب مجدد. تكثير سه ژن منتخب L32، β-actin و Ubiquitin ابتدا با روش RT-qPCR انجام و سپس پايداري ژني با نرم‌افزارهاي GeNorm و BestKeeper محاسبه شد. نتايج نشان داد كه بيان ژن L32 در مقايسه با ژن¬هاي β-actin و Ubiquitin پايداري كمتري دارد. نرم‌افزار GeNorm بهترين تركيب ژني را ژن¬هاي β-actin و Ubiquitin معرفي و ارزش پايداري (M) براي بهترين تركيب ژني را 083/0 محاسبه كرد. با توجه به نتايج به دست آمده از نرم¬افزار BestKeeper، با ثبات¬ترين ژن خانه¬دار به منظور نرمال‌سازي داده¬هاي بيان ژن در آناليز نتايج واكنش زنجيره¬اي پلي‌مراز در زمان واقعي، ژن β-actin مشخص شد.