بيان پروتئين پوششي نوتركيب ويروس X سيب زميني در باكتري Escherichia coli

اهداف: ويروس X سيب زميني (PVX) از خانواده Alphaflexiviridae و جنس Potexvirus يكي از رايج ترين و گسترده ترين ويروس هاي آلوده كننده سيب زميني در جهان مي باشد. به دليل گسترش و خسارت اقتصادي اين ويروس در ايران، شناسايي و رديابي آن با استفاده از روش هاي با صرفه تر ضروري مي باشد. توليد آنتي بادي چندهمسانه اي با استفاده از فناوري دي اِن اِي نوتركيب، يك راهكار مفيد براي تسهيل شناسايي اين ويروس در طبيعت مي باشد. مواد و روش ها: بر اين اساس، در بررسي حاضر، يك نمونه سيب زميني آلوده به PVX از مزارع سيب‌زميني در زرند، استان كرمان جمع آوري و آلودگي آن نسبت به ويروس مذكور توسط آزمون DAS-ELISA تاييد گرديد. جدايه مذكور جهت تكثير، بر روي توتون (Nicotiana glutinosa) مايه‌زني گرديد. پس از استخراج آر اِن اِي از گياه آزمون، با استفاده از واكنش RT-PCR و آغازگرهاي اختصاصي حاوي جايگاه برش براي آنزيم هاي برشي، توالي پروتئين پوششي ويروس تكثير و در ناقل بيان پروكاريوتي (pQE60) همسانه سازي گرديد. پلاسميد نوتركيب، به باكتري Escherichia coli سويه M15، منتقل شد. نتايج: پس از القاي بيان، پروتئين مورد نظر استخراج و با تكنيك SDS-PAGE در ژل پلي آكريلاميد 12.5 % مورد بررسي قرار گرفت. نتايج حاصل بيانگر آن است كه وزن مولكولي باند حاصله در آزمون SDS-PAGE با وزن مولكولي پروتئين پوششي (kDa 24) مطابقت دارد. همچنين بيان پروتئين پوششي ويروس در تكنيك دات بلات نيز تأييد گرديد. نتيجه گيري نهايي: در اين تحقيق، يك آنتي ژن نوتركيب مناسب جهت تشخيص ويروس X سيب زميني تهيه گرديد كه به-خوبي توسط آنتي سرم توليد شده از طريق تزريق پيكره هاي كامل ويروس به خرگوش در آزمون دات بلات شناسايي شد. توليد آنتي بادي چندهمسانه اي با استفاده از آنتي ژن ويروسي نوتركيب، گامي موثر در زمينه تسريع و تسهيل فرآيند شناسايي سرولوژيكي نمونه هاي آلوده به اين ويروس مهم خواهد بود.