تاثير متيل جاسمونات در بيان نسبي ژنهاي درگير در مسير بيوسنتز گليسيريزين در كشت سوسپانسيون سلولي شيرين بيان (Glycirrhiza glabra)

The effect of methyl jasmonate on the relative expression of genes involved in the pathway of glycyrrhizin biosynthesis in cell suspension culture of licorice (Glycirrhiza glabra

ريشه ها و استولن هاي شيرين بيان يكي از مهم ترين داروهاي گياهي در دنيا را تشكيل داده و حاوي مقادير زيادي ماده موثره گليسيريزين كه يك نوع تريترپن ساپونين است، مي باشد. در اين تحقيق بيان نسبي ژن هاي موثر در مسير بيوسنتز اين متابوليت ثانويه شامل ژن هاي bAS، SQS، CYP88D6 و CYP72A154 در كشت سوسپانسيون سلولي شيرين بيان در حضور متيل جاسمونات مورد بررسي قرار گرفت. متيل جاسمونات در غلظت صد ميكرومولار در فاز رشدي ثابت به همراه تيمار كنترل (بدون متيل جاسمونات) به سوسپانسيون سلولي اضافه و سلول ها در فواصل زماني 24، 48 و 72 ساعت برداشت و ميزان بيان نسبي هر ژن محاسبه و نمودارها ترسيم شد. نتايج نشان داد كه دو ژن bAS و CYP88D6 در 48 ساعت بعد از تيمار و ژن هاي SQS و CYP72A154 در 72 ساعت بعد از تيمار بيش ترين ميزان بيان را نشان دادند. ژن هاي bAS و SQS افزايش بيان بيشتري نسبت به ژن هاي CYP88D6 و CYP72A154 نشان دادند زيرا ژنهاي bAS و SQS در مسير اوليه بيوسنتز دخالت داشته و نيز در بيوسنتز ساير ساپونين ها مانند سوياساپونين نيز دخالت دارند در حالي كه ژن هاي CYP88D6 و CYP72A154 در مسير نهايي بيوسنتز گليسيريزين دخالت دارند. با توجه به اينكه قبلا حضور گليسيريزين در ريشه تاييد شده بود، اين تحقيق نيز به دليل افزايش بيان ژن هاي درگير در مسير بيوسنتز و نيز پايداري نسبي بيان آن ها در كشت سوسپانسيون سلولي شيرين بيان، حضور گليسيريزين را در كشت سلولي اين گياه تاييد كرد.

The roots and stolons of Glycyrrhiza species constitute one of the most important crude drugs in the world and contain a large amount of glycyrrhizin, an oleanane-type triterpenoid saponin. In this study, relative expression of the genes involved in the biosynthesis pathway of this secondary metabolite, including bAS, SQS, CYP88D6 and CYP72A154, was investigated in the presence of methyl jasmonate in a culture of cell suspension of licorice. Methyl jasmonate was added at a concentration of 100 μM in a stationary growth phase to cell suspension. The control experiment had no methyl jasmonate. The cells were harvested at intervals 24, 48 and 72 hours’. The experimental was done as split plot in time based on completely randomized design with two replications. The results showed that the two bAS and CYP88D6 genes had the highest expression levels in 48 h after the treatment. SQS and CYP72A154 genes, had the highest expression levels in 72 hours after treatment, but the expression of CYP72A154 didn’t show significant difference comparing to control. The bAS and SQS genes showed higher expression than CYP88D6 and CYP72A154 genes, Because the bAS and SQS genes are involved in the initial pathway of biosynthesis and also are involved in the biosynthesis of other saponins, such as soyasaponin, while The CYP88D6 and CYP72A154 genes are involved in the final pathway biosynthesis for glycyrrhizin. The previous studies had been confirmed presence of glycyrrhizin in the root. In this study, the increased expression of the genes involved in the biosynthesis pathway of glycyrrhizin in cell suspension culture confirmed the presence of glycyrrhizin in cell cultures of licorice.