اثر مكمل سازي محيط كشت با اسيد فوليك بر بلوغ برون تني تخمك هاي گاو

Effect of folic acid addition to the medium on in vitro maturation of bovine oocytes

اثر مكمل كردن محيط كشت با غلظت هاي مختلف اسيد فوليك (ويتامين B9) بر بلوغ برون تني تخمك هاي گاو در قالب دو آزمايش بررسي شد. بهينه سازي محيط كشت بلوغ تخمك گاوي از راهبردهايي است كه با اثر بر كيفيت بلوغ و باروري، در نهايت منجر به افزايش كيفيت رويان توليدي گاو مي شود. در آزمايش اول براي تعيين غلظت اسيد فوليك و هموسيستئين، فوليكول ها به دو دسته كمتر و بيشتر از هشت ميلي متر تقسيم بندي شدند. سپس غلظت اسيد فوليك و هموسيستئين در هر دو گروه فوليكولي و همچنين در محيط كشت تجاري اندازه گيري شد. در آزمايش دوم، بلافاصله پس از كشتار، تخمدان ها به آزمايشگاه منتقل و با آسپيره كردن كمپلكس هاي تخمك -كولوموس از فوليكول هاي دو تا هشت ميلي متري استحصال شد. تخمك ها به طور تصادفي به چهار گروه تقسيم، و بر اساس نتايج آزمايش نخست، غلظت هاي مختلف اسيد فوليك (صفر، 10، 100 و 1000 نانوگرم در ميلي ليتر) به محيط كشت بلوغ اضافه شد. پس از گرم خانه گذاري تخمك ها، درصد تخمك هاي بالغ شده با استفاده از رنگ آميزي هوخست تعيين شد. غلظت اسيد فوليك و هموسيستئين در فوليكول هاي با قطر كمتر از هشت ميلي متر، بيشتر از فوليكول هاي بزرگ تر از هشت ميلي متر و همچنين بيشتر از غلظت آن ها در محيط بلوغ بود. مكمل كردن محيط بلوغ با 100 نانوگرم اسيد فوليك/ميلي ليتر نسبت به گروه شاهد، موجب افزايش درصد تخمك هاي مرحله متافاز دو شد (0/05 >P). نتايج نشان داد كه افزودن اسيد فوليك با توجه به غلظت اسيد فوليك و هموسيستئين محيط كشت، بلوغ برون تني تخمك هاي گاوي را بهبود مي بخشد.

The effect of addition of different concentrations of folic acid (vitamin B9) to the culture medium on in vitro maturation of bovine oocytes was investigated in two experiments. Optimization of bovine oocyte maturation medium is one of the strategies affecting quality of maturity and fertility, ultimately resulting in increasing the quality of produced bovine embryos. In the 1st experiment, to specify the concentrations of folic acid and homocysteine, ovarian follicles were divided into two categories including follicles with more or less than eight mm of diameter. Then, the concentrations were measured in both follicle groups as well as a commercial culture medium. In the second experiment, bovine ovaries were transferred to the laboratory immediately after slaughter and the cumulus-oocyte complexes were collected by aspiration from 2-8 mm diameter follicles. Oocytes were randomly divided into four groups and different levels of folic acid (0, 10, 100 and 1000 ng/ml) were added to maturation medium based on the results of the first experiment. Following incubation of oocytes, the percentage of mature oocytes was determined by Hoechst staining. The concentrations of folic acid and homocysteine in follicles with diameter of less than eight mm was higher than those with diameter of greater than eight mm, as well as the culture medium Supplementation of maturation medium with 100 ng/ml folic acid increased the percentage of metaphase-II oocytes compared to the control (P <0.05). Considering the concentrations of folic acid and homocysteine in the medium, results showed that the addition of folic acid improves in vitro maturation of bovine oocytes.