كشت سلولي اوليه از بافت باله دمي ماهي سفيد درياي خزر (Rutilus frisii kutum)

The Primary cell culture from caudal fin tissue of Caspian Kutum (Rutilus frisii kutum)

در اين مطالعه رده‌هاي اوليه سلولي از طريق كشت قطعاتي از باله‌ي دمي ماهي سفيد درياي خزر به روش كاشت با دو تيمار (بدون آنزيم و تيمار با آنزيم تريپسين) انجام شد. بدين منظور قطعات (1 ميلي­متر مكعب) بافت باله دمي در شرايط استريل از 10 عدد ماهي جوان و سالم با ميانگين وزن 1±12 گرم و ميانگين طولي 1±11 سانتي متر جدا شده و در محيط كشت L-15 (Leibovitz L-15) داراي سرم جنين گاوي (10 و 20 درصد) و آنتي بيوتيك پني سيلين استرپتومايسين با pH 8/6 و 2/7 كاشته شد و در دماي 21 و 24 درجه سانتي‌گراد نگهداري گرديدند. مخلوطي از انواع سلول‌ها از روز دوم بصورت پراكنده و متصل به فلاسك كشت مشاهده گرديدند، اما لايه‌ سلولي يكنواخت شامل سلول‌ها با مورفولوژي ناهمگن اپيتليالي و شبه فيبروبلاستي پس از 14-12 روز تشكيل گرديد. كشت مجدد سلول‌ها با استفاده از آنزيم تريپسين انجام شد. در كشت‌هاي مجدد، تك لايه‌ سلولي شامل سلول‌هايي با مورفولوژي همگن اپيتليالي تشكيل شد. تاكنون اين سلول‌ها 21 بار پاساژ داده شدند و اين نتايج نشاندهنده امكان توليد رده سلولي دائمي از بافت باله دمي ماهي سفيد درياي خزر مي‌باشد.

In the present study, the primary cell lines were derived from caudal fin explants of the Caspian Kutum (Rutilus frisii kutum), using two treatments (tissue culturing without enzyme and after trypsin treatment). For this purpose, pieces of caudal fin tissue (1 millimeter cubic) were isolated from 10 healthy young fish with an average weight of 12±1 g and a mean length of 11±1cm in sterile condition then were explanted in L-15 medium (Leibovitz L-15) with fetal bovine serum (10 and 20%) and penicillin-streptomycyne at pH 6.8 and 7.2 and kept at 21 and 24 °C. From the second day, a mixture of various cell types was observed and attached to the cell culture flask, but the uniform cell layer consist of cells with heterogeneous epithelial morphology and fibroblast-like were appeared after 12 to 14 days. Subculture was performed using trypsin enzyme. In subcultures, a single cell layer consists of cells with homogeneous epithelial morphology was formed. So far, these cells have been passaged for 21 times. Results indicate the possibility of producing a permanent cell line from the fin tissue of Rutilus frisii kutum.