اثر سانتريفيوژ و كلسترول بارگذاري‌شده با سيكلودكسترين در رقيق‌كننده ليسيتين سويا بر‌كيفيت اسپرم قوچ قزل بعد از فرآيند ذوب

Effects of centrifugation and cholesterol-loaded with cyclodextrin in the soybean lecithin -based extender on the quality of the post-thaw sperm of Ghezel ram

حفظ تحرك و زنده ­ماني اسپرم قوچ هنگام استفاده از اسپرم منجمد­شده براي به­ دست آوردن ميزان آبستني بالا مهم است. هدف از اين مطالعه بررسي اثر سانتريفيوژ و كلسترول بارگذاري­ شده با سيكلودكسترين در ليسيتين سويا به­ عنوان رقيق­ كننده، بر كيفيت اسپرم بعد از فرايند انجماد-ذوب بود. نمونه‌هاي مني از 5 رأس قوچ قزل 5-4 ساله به­مدت 3 هفته جمع‌آوري شدند. بعد از ارزيابي اوليه و تائيد كيفيت، نمونه‌ها به 8 قسمت مساوي تقسيم شدند. پلاسماي مني 4 نمونه در دماي 30 درجه سلسيوس به ­وسيله سانتريفيوژ حذف گرديد. نمونه‌هاي باقي­مانده بدون سانتريفيوژ به­ وسيله بافر تريس و غلظت‌هاي مختلف كلسترول لودشده با سيكلودكسترين (0، 0/75، 1/5 و 3 ميلي‌گرم در 108×1/2 اسپرم) و 7 درصد گليسرول مشابه با گروه اول رقيق‌سازي شدند. سپس نمونه‌ها تا دماي 5 درجه سلسيوس سردسازي شده و در پايوت‌هاي 0/25 ميلي‌ليتري ذخيره شدند. نتايج نشان‌دهنده بهبود معني‌دار پارامترهاي تحرك ‌كل و پيش‌رونده،­ سرعت در مسير مستقيم، سرعت در مسير منحني، تناوب عرضي زنش، يكپارچگي غشاي ‌آكروزومي، يكپارچگي غشاي‌پلاسمايي، ظرفيت تام آنتي­اكسيداني و فعاليت آنزيم ­هاي سوپراكسيد ديسموتاز، گلوتاتيون ‌پراكسيداز و مالون­دي‌آلدئيد، بعد از ذوب در گروه دريافت­ كننده 1/5 ميلي‌گرم سيكلودكسترين در مقايسه با ساير گروه­ها بود (05/0p­<). همچنين تحرك‌ كل و پيش‌رونده، سرعت در مسير منحني، يكپارچگي غشاي پلاسمايي، ظرفيت تام آنتي‌اكسيداني و فعاليت آنزيم­ هاي سوپراكسيد ديسموتاز و گلوتاتيون ‌پراكسيداز به­طور معني‌داري در گروه بدون سانتريفيوژ نسبت به گروه با سانتريفيوژ، بالاتر بود (05/0p­<). به­ طوركلي نتايج نشان داد كه افزودن 1/5 ميلي‌گرم كلسترول بارگذاري­شده با سيكلودكسترين باعث بهبود اغلب پارامترهاي مورد ارزيابي نسبت به ساير گروه‌ها شد.

When using frozen-thawed semen, maintaining the motility and viability of ram sperm is important for achieving high pregnancy rates. The goal of this research was to clearly elucidate the effects of centrifugation and cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) in a soy lecithin-based extender on post-thaw ram sperm quality. Sperm samples were collected from 5 Ghezel rams with the age of 4-5 years for 3 weeks. After the initial assessment, the approved semen samples were combined and divided into 8 equal parts. Four samples were combined at 30˚C and the seminal plasma was then removed by centrifugation. The semen from the other four samples was not centrifuged and was diluted with Tris buffer plus different concentrations of CLC (0, 0.75, 1.5 and 3 mg/ 1.2×108 spermatozoa) and 7% glycerol, similar to the first group. The samples were then cooled to 5˚C and frozen in 0.25 ml straws. After thawing, total motility (TM) and progressive motility (PM), straight line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL), beat cross frequency (BCF), total antioxidant capacity (TAC), superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), glutathione peroxidase (GPX), the integrity of the acrosome membrane and the integrity of the plasma membrane were significantly (p<0.05) higher in the 1.5 mg CLC group compared to the other groups. Also TM, PM, VCL, TAC, SOD, GPX and plasma membrane was significantly (p<0.05) higher in the group without centrifugation than in the centrifugation group. Overall, the results suggested that addition of 1.5 mg CLC improves most of the sperm parameters measured in vitro in comparison to other groups.