بررسي تأثير افزودن رقيق ‌كننده‌هاي حاوي اديتات سديم و پروپيلن گليكول بر ماندگاري اسپرم منجمد قوچ قزل

Investigating the effect of diluents contained EDTA and Propylene glycol on survival of Ghezel ram frozen semen

اديتات سديم با كلات­ كردن كلسيم و ممانعت از ورود كلسيم خارج ­سلولي به داخل سلول و پروپيلن گليكول با ممانعت از تشكيل بلورهاي يخ داخل­سلولي، از اسپرم در برابر فرآيند انجماد محافظت مي­ كنند. مطالعه حاضر به منظور ارزيابي اثر افزودن سطوح مختلف اديتات و پروپيلن­ گليكول بر كيفيت و ماندگاري اسپرم منجمد قوچ قزل انجام پذيرفت. پس از ارزيابي ­هاي اوليه مني 5 رأس قوچ نژاد قزل از لحاظ غلظت، حجم و رنگ نمونه، سلامت آكروزوم، حركت موجي، تحرك­­ كل و پيش رونده، درصد زنده ­ماني و درصد اسپرم ­هاي غيرطبيعي، نمونه ­هاي با غلظت 2/5 ميليارد اسپرم، حركت پيش رونده­ ي بالاي 70 درصد و حجم بيش از 0/5 ميلي­لي تر در گروه شاهد با مخلوط تريس، گليسرول و زرده تخم­ مرغ و در گروه­ هاي تيمار با استفاده از 1، 1/5، 2 و 2/5 ميلي­ مولار (EDTA (ethylenediaminetetraacetate و 1، 2، 3 و 7 درصد پروپيلن­ گليكول رقيق شدند. سپس داخل پايت­ هاي 0/25 ميلي­ليتري كشيده شده و بعد از سردسازي در دماي 5 درجه سلسيوس به مدت 10-8 دقيقه، ابتدا در فاصله 5-4 سانتي­متري بالاي سطح نيتروژن مايع قرار گرفته و در نهايت در داخل آن غوطه ­ور شدند. خصوصيات كمّي اسپرم شامل زنده ­ماني، درصد تحرك كل، حركت پيش رونده و درجا، تست يكپارچگي غشاي پلاسمايي، درصد اسپرم­ هاي غيرطبيعي، سلامت آكروزوم در كل سلول­ ها و در سلول­ هاي مردهدر روزهاي صفر، 20، 40 و 60 فرآيند انجماد بررسي شدند. تيمار 1درصد پروپيلن­ گليكول با ساير گروه‌هاي تيمار پروپيلن­ گليكول و گروه شاهد در ميزان تحرك­ كل، درصد زنده ­ماني، آكروزوم سالم، تست يكپارچگي غشاي پلاسماييو حركت پيش رونده تفاوت معني­دار داشت (05/0p<). در بين تيمارهاي EDTAنيز تيمار با 2/5 ميلي­ مولار EDTA بهترين عملكرد را دارا بود ولي تفاوت معني­داري با ساير گروه‌هاي تيمارEDTAو گروه شاهد نداشت. بنابراين نتايج بررسي حاضر نشان داد كه رقيق­­كننده­ هاي حاوي پروپيلن­ گليكول و EDTA مي ­توانند پارامترهاي كيفي اسپرم قوچ را بهبود بخشند.

The present study was performed to evaluate the effect of adding different levels of EDTA and propylene glycol on quality and survival of Ghezel ram frozen semen. After primary evaluations on fresh semen for parameters including total motility, progressive motility, non-progressive motility, viability, abnormal sperm, and acrosome integrity in total cell and acrosome integrity in dead cells, samples with a concentration of 2.5 billion sperm and a progressive motility of over 70% and a volume greater than 0.5 ml were diluted with 1, 1.5, 2, 2.5 mM EDTA and 1, 2, 3% propylene glycol as an additive and propylene glycol 7% as a constitute. Straws (250 µl) were filled with dilution and were placed in a refrigerator for 1.5 to 2 hours to cool to reach 5°C. After cooling they are placed in 4-5 cm above nitrogen for 8-10 minutes and ultimately were immersed in liquid nitrogen. qualitative parameters of sperm included viability, total motility, progressive and non-progressive motility, hypo osmotic swelling test, percentage of acrosome integrity and acrosome health in dead cells were investigated in 0, 20, 40 and 60 days of freezing processes. The results of this experiment showed that diluent with 1% propylene glycol concentration in comparison with other group improved total and progressive motility, percentage of viability, acrosome integrity and HOST (p0.05). The results showed that dilutions of EDTA and propylene glycol could improve quantitative parameters of ram semen.