بررسي اثر سم ميكروسيستين از جلبك ميكروسيستيس بر روي رده سلولي HepG2 كارسينوماي كبد انسان با استفاده از Real -TimePCR

The effect of microcystin toxin from algae microcystis on human liver carcinoma HepG2 cell line by using Real-TimePCR

سابقه و هدف: ميكروسيستين يك هپتاپپتيدحلقوي است كه به عنوان فراوانترين سيانوتوكسين توليدي با توزيع گسترده جهاني شناخته مي شودو رايج ترين هپاتوتوكسين توليد شده توسط سيانوباكترها مي باشند.فاقد نفوذ به غشا سلول هاي مهره داران است به همين دليل سميت اين سيانوتوكسين ها تنها به اندام هايي محدود مي گردد كه مانند كبد بيان كننده و انتقال دهنده (ترانسپورتر) آنيوني آلي بر روي غشا سلولي خود باشند. در اين مطالعه ميزان بيان ژن هاي BAX وBCL2 در رده سلولي HepG2 تحت تاثير ميكروسيستين با استفاده از تكنيك Real-TimePCR مورد بررسي قرار گرفت تا بتوان با انجام تحقيق و بررسي بيشتر در مورد مكانيسم و نحوه اثر اين سم از آن به عنوان يك هدف مناسب براي درمان سرطان كبد استفاده كرد. روش كار: در ابتدا پاساژ سلولي ،رده سلولي HepG2 انجام شد، سپس تستMTTassay صورت گرفت،در مرحله بعد استخراج RNA وسنتز CDNA صورت گرفت و جهت اطمينان از خلوص نمونه RNA از اسپكتروفتومتر نانودراپ استفاده شد، سپس پرايمرهاي اختصاصي و مناسب ژن مورد نظر طراحي و سنتز گشت و با استفاده از Real-Time PCR بيان ژن هاي Bax وBCL2 سنجيده شد. يافته ها: اين سم بيان ژن هاي BAX را افزايش داده و موجب كاهش ژن هاي BCL2 به صورت چشمگيري شده است. نتايج : ژن BAX به عنوان يك پروآپوپتوز بيانش افزايش يافته و هر چقدر HepG2 مدت زمان بيشتري در معرض سم قرار گرفت ميزان بيان BAX افزايش يافته و در مقابل بيان BCL2 كاهش و در اين حالت سلول به سمت آپوپتوزي شدن پيش رفت.

Pioneering and Objective: Microsystemin is a brain heptapide that is known as the most abundant cyanotoxin produced in the world's most extensive distribution, and is the most commonly produced hepatotoxin produced by cyanobacteria. This complication affects vertebrate cells, and thus the cyanotoxins are limited to limbs, which, like the liver, express and transport anionic organic carriers on their cells. In this study, the expression of BAX and BCL2 genes in the HepG2 cell line under the influence of Microsystemin was investigated using Real-TimePCR, so that it can be studied further by studying the mechanism and its effect as an appropriate target for treatment. Liver cancer.Methods: At first, HepG2 Cell Cell Passage was performed, then MTTassay test was performed. Next, RNA extraction and CDNA extraction were used and the RNA sample was purified from the nanotypic spectrophotometer, then the specific and suitable primers for the desired gene were designed an‎d synthesized and using the Real-Time PCR, the expression of Bax and BCL2 genes was measuredResults: The BAX gene was expanded as a pro-apoptosis, and the more hepG2 was exposed to venom, the higher the expression of BAX, and the expression of BCL2 decreased, and in this case the cell went to apoptosis