ارزيابي توان تكثير سلول‌هاي فيبروبلاست بر داربست پلي‌كاپرولاكتون ـ كيتوسان ـ تانيك اسيد

Evaluation of Fibroblast Cell Proliferation Assay on Polycaprolactone-Chitosan- Tannic Acid Scaffold

زمينه و هدف: مهندسي بافت اجزاء بافت تخريب شده را شناسايي و در جهت بهبود و عملكرد آن راهكارهاي منطقي ارايه مي‌دهد. يكي از اين راهكارها ساخت يك داربست مخلوط با پلي ساكاريد و آنتي اكسيدان مصنوعي است تا سلول‌هاي بنيادي در داخل آن كشت داده شوند، لذا هدف از اين مطالعه تعيين و تكثير سلول‌هاي فيبروبلاست بر داربست پلي‌كاپرولاكتون ـ كيتوسان ـ تانيك اسيد بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي از ماده پلي كاپرولاكتون، پودر كيتوسان و تانيك اسيد داربستي جهت رشد سلول‌هاي فيبروبلاست تهيه شد. سپس جهت پژوهش‌هاي بعدي گروه‌هاي زير طراحي شدند؛ گروه 1 داربست پلي كاپرولاكتون، گروه 2 داربست پلي كاپرولاكتون‌ ـ كيتوسان، گروه 3 داربست پلي‌كاپرولاكتون‌ـ تانيك اسيد و گروه 4 داربست پلي كاپرولاكتون‌ـ كيتوسان تانيك اسيد در اين مطالعه پوست ختنه گاه انسان تهيه و سلول‌هاي فيبروبلاست لايه درم آن پس از انجام تكنيك‌هاي آزمايشگاهي جدا شده، سپس سلول‌ها به همراه محيط كشت DMEM درون فلاسك‌هاي كشت سلول قرار داده و در انكوباتور 5 درصد CO2دار نگهداري شدند. ده هزارسلول فيبروبلاست در چاهك‌هاي 96 خانه‌اي حاوي محلول DMEM و داربست‌هاي گروه‌هاي بالا منتقل و سپس ميزان تكثير و بقاء سلول‌هاي فيبروبلاست با استفاده از روش MTT و هم‌چنين با استفاده از ميكروسكوپ SEM نفوذ سلول‌هاي فيبروبلاست بر روي داربست وهم چنين به منظور بررسي گروه‌هاي شيميايي موجود در پلي‌مرازها از طيف سنج FTIR استفاده شد. داده‌ها با استفاده از آزمون‌هاي آناليز واريانس و تست تعقيبي توكي تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها: ميانگين درصد بقاء سلول فيبروبلاست بر اساس تست MTT در 24 ساعت در گروه داربست پلي‌كاپرولاكتون ـ تانيك اسيد در مقايسه با گروه داربست پلي‌كاپرولاكتون افزايش آماري معني‌داري نشان مي‌دهد(0/05p<). هم‌چنين نتايج نشان مي‌دهد كه ميانگين درصد بقاء سلول بر اساس تست MTT در 24 ساعت در گروه داربست پلي‌كاپرولاكتون‌ـ كيتوسان ـ تانيك اسيد در مقايسه با گروه داربست پلي‌كاپرو لاكتون افزايش آماري معني‌داري نشان مي‌دهد(0/05p<). هم‌چنين ميانگين درصد بقاء سلول در داربست پلي كاپرولاكتون ـ كيتوسان در مقايسه با گروه پلي كاپرولاكتون از نظر آماري معني‌دار نمي‌باشد. نتيجه‌گيري: نتايج اين تحقيق نشان داد كه داربست پلي كاپرولاكتون‌ـ كيتوسان ـ تانيك اسيد با توجه به خاصيت هيدروفيل بودن و زيست سازگاري كيتوسان و تانيك اسيد، احتمالاً مي‌تواند داربستي مناسب براي فعاليت سلول‌هاي فيبروبلاست در داربست باشد. هم‌چنين احتمالاً مي‌تواند محيط مناسب و سازگار با شرايط طبيعي بدن براي رشد و تكثير سلول‌هاي ديگر باشد.

Background & aim: Tissue engineering identifies degraded tissue components and provides rational solutions to improve and perform them. One of these approaches is to fabricate a mixed scaffold with polysaccharide and synthetic antioxidants for stem cells to be cultured inside. The aim of this study was to evaluate the potency of poly caprolactan-chitosan-tannic acid scaffold for proliferation of fibroblast cells. Methods: In the present experimental study, polycaprolactane, chitosan powder and tannic acid scaffold were prepared for growth of fibroblast cells. Subsequently, the following groups were designed: Group 1: Polycaprolactane scaffold Group 2: Polycaprolactane-chitosan scaffold Group 3: Polycaprolactane-tannic acid scaffold Group 4: Polycaprolactane-chitosan-tannic acid scaffold. The human foreskin was prepared and the dermal layer fibroblast cells were isolated after laboratory tests, then the cells were placed in cell culture flasks with DMEM medium and stored in a 5% CO2 incubator. Ten thousand cell fibroblasts were transferred to 96-well wells containing DMEM solution and scaffolds and then fibroblast cell proliferation and viability were determined by MTT assay and by SEM microscopy to determine the infiltration of fibroblast cells into scaffolds and also in order to review of the chemical groups in the polymers was performed using a FTIR spectrometer. The results were analyzed by the SPSS software; ANOVA and Tukey's post hoc test after the data were analyzed uniformly. Results: The mean survival rate of fibroblast cells based on MTT assay at 24 h was significantly increased in the polycaprolactone-tannic acid scaffold group (p<0.05) compared to the polycaprolactone scaffold group (p<0.05). The results also indicated that the mean survival of cells based on MTT assay at 24 h was significantly increased in the polycaprolactone-chitosan-tannic acid scaffold group (p<0.05) compared to the polycaprolactone scaffold group (p<0.05). Moreover, the mean cell viability in the polyprolactone-chitosan scaffold was not statistically significant compared to the polyprolactone group. Conclusion: Due to its hydrophilic properties and biocompatibility of chitosan and tannic acid, poly caprolactone-chitosan-tannic acid scaffold may be a suitable scaffold for the activity of fibroblast cells in the scaffold. It can also be a good environment for the growth and proliferation of other cells.