تاثير ويتامين e بر القاء كلوني‌زايي سلول‌هاي بنيادي اسپرماتوگوني در محيط آزمايشگاه

Effect of Vitamin E on Induction of Colonization of Spermatogonial Stem Cells in Vitro

سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني، سلول هاي زاياي غير متمايزي هستند كه در طي مرحله پس از بلوغ با حفظ تعادل بين خود نوسازي و تمايز، سبب حفظ اسپرماتوژنز در طول حيات موجود مي شوند. هدف از اين مطالعه بررسي تاثير غلظت هاي مختلف ويتامين e روي كلوني‌زايي سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني است.مواد و روش‌ها: سلول هاي اسپرماتوگوني بيضه ي بره ي نابالغ طي دو مرحله هضم آنزيمي جدا و به روش حذف تمايزي تخليص شدند. اين سلول ها به چهار گروه تقسيم و به مدت 10 روز تحت تيمارهاي مختلف قرار گرفتند. گروه شاهد (كشت ساده سلول هاي اسپرماتوگوني در محيط dmem حاوي 1 درصد آنتي بيوتيك و 5 درصد fbs كه هيچ‌گونه تيماري را دريافت نكرد و گروه‌هاي 1، 2 و 3 كه علاوه بر محيط بالا به ترتيب تحت تيمار با 20، 40 و 80 ميكروگرم بر ميلي ليتر ويتامين e قرار گرفتند. تعويض محيط كشت هر 72 ساعت انجام شد و تعداد و قطر كلوني هاي تشكيل‌شده در روزهاي 4، 7 و 10 پس از كشت به‌وسيله‌ي ميكروسكوپ معكوس بررسي گرديد. شناسايي كلوني‌ها با استفاده از ايمنوسيتوشيمي آنتي‌ژن pgp9.5 تائيد گرديد.نتايج: ميانگين تعداد و مساحت كلوني هاي اسپرماتوگوني در روزهاي مختلف كشت در تيمارهاي مختلف اختلاف معني‌داري با گروه شاهد نداشت. ميانگين مساحت كلوني‌ها در روز دهم به‌طور معني‌داري بيشتر از روز چهارم بود (p<0/05).نتيجه‌گيري: نتايج حاصل از اين مطالعه نشان مي‌دهد كه افزودن ويتامين e به‌عنوان آنتي‌اكسيدان احتمالاً نقش چشمگيري در القا كلوني زايي سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني در كشت كوتاه‌مدت در محيط آزمايشگاه ندارد.

Spermatogonial stem cells (SSCs) are undifferentiated germ cells that maintain spermatogenesis during lifetime by balancing between self-renewal and differentiation. The aim of this study was to investigate the effect of different concentrations of vitamin E on spermatogonial stem cells colony formation. Material & Methods SSCs were isolated from testes of prepubertal lamb by two step enzymatic digestions then purified by differential pllating. The cells were cultured for 10 days in 4 groups. Control group: Basic media (DMEM environment which contains 1% antibiotic and 5% FBS( and treatment groups were treated with 20, 40 and 80 µmol/ml vitamin E added to basic media respectively. Changing of culture media was performed every 72h. Colony number and diameter assay was done by inverted microscope. Identification of SSCs was performed by immunocytochemistry assay against PGP9.5. Results there were no significant difference in colony number and surface area between treatment groups and between treatment and control groups in days 4, 7and 10. Colony surface area was significantly increased at day 10 compared to day 4 (P<0.05). Conclusion The results of this study showed vitamin E as an antioxidant doesn’t have significant effect on colony induction of SSCs in short term culture in vitro.