كلونينگ و بيان آنتاگونيست گيرنده‌ي اينترلوكين 1 نوتركيب انساني در سيستم‌هاي بياني Escherichia coli شامل (DE3) Bl21، (DE3) Origami و (DE3) Rosetta

(Cloning and Expression of Recombinant Human Interleukin 1 Receptor Antagonist in Escherichia Coli Strains, BL21 (DE3), Rosetta (DE3), and Origami (DE3

مقدمه: آنتاگونيست گيرنده‌ي اينترلوكين 1 (IL-1RA)، پروتئيني 153 آمينواسيدي (با وزن مولكولي 16/83 كيلودالتون) است. اين پروتئين دارويي، با نام تجاري آناكينرا شناخته ‌شده است و كاربرد مؤثري در درمان آرتريت روماتوئيد دارد. اين مطالعه، به ‌منظور بررسي بيان پروتئين نوتركيب آنتاگونيست گيرنده‌ي اينترلوكين 1 در سويه‌هاي باكتري (Escherichia coli (E. coli انجام شد. روش‌ها: بهينه‌سازي ژن IL-1 RA با استفاده از GenScript انجام شد و در پلاسميد pUC18 به عنوان وكتور كلونينگ، قرار گرفت. سپس، اين پلاسميد با دو آنزيم محدود كننده‌ي NdeI و BamHI برش خورد. ژن IL-1RA از روي ژل تخليص شد. ژن IL-1RA به داخل وكتور بياني وارد شد. سازه‌ي كاست بياني به داخل باكتري‌هاي E. coli Origami، E. coli BL21 و E. coli Rosetta با روش كلريد كلسيم (CaCl2) و شوك حرارتي منتقل شد. يافته‌ها: تشخيص و تأييد كلني‌هاي منتقل شده با Colony polymerase chain reaction (Colony PCR) انجام شد. القاي اين ژن با به كار گيري (Isopropyl β- d-1-thiogalactopyranoside (IPTG انجام گرفت. بيان پروتئين با استفاده از روش‌‌هاي Western blotting و Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) تأييد شد و به وسيله‌ي رزين نيكل تخليص گرديد. آناليز بياني سوش‌هاي E. coli ترانسفورم شده تأييد كرد كه ورود سازه به داخل وكتور بياني انجام‌ شده است. وزن مولكولي پروتئين بيان‌ شده، 83/16كيلو دالتون برآورد شد. نتيجه‌گيري: در اين مطالعه، آنتاگونيست گيرنده‌ي اينترلوكين 1 انساني در باكتري E. coli Origami با مقادير بالا نسبت به سويه‌هاي ديگر E. coli، به طور موفقيت‌آميزي توليد شد. باكتري E. coli Origami مي‌تواند به‌ عنوان ميزبان مناسب در توليد IL-1RA نوتركيب انساني مورد استفاده قرار گيرد و اين فن‌آوري قابليت بومي‌سازي دارد.

Background: Recombinant human interleukin-1 receptor antagonist (IL-1RA) is a protein with 153 amino acids and molecular weight of 16.83 kDa. This drug protein is known as Anakinra, and has an effective application in the treatment of rheumatoid arthritis. This study was conducted to examine the produce of the recombinant IL-1RA protein in Escherichia coli (E. coli) strains. Methods: Codon optimization of IL-1RA gene was done using GenScript, and the gene was cloned in the pUC18 as cloning vector. Then, plasmid was cut by two restriction enzymes including NdeI and BamH1 enzymes. IL-1RA gene was purified from the agarose gel. IL-1RA gene was ligated into expression vector. The constructed expression cassette was transformed into E. coli BL21 (DE3) Origami (DE3) and Rosetta (DE3) using CaCl2 and heat shock method. Findings: Identification and confirmation of transformed colonies was performed using colony polymerase chain reaction (PCR). Induction of this gene was done with isopropyl β- d-1-thiogalactopyranoside (IPTG). The protein expression was analyzed using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and western blotting techniques, and it purified by Ni nickel resin. Expression analysis of transformed E. coli strains confirmed that gene integrated into expression host. Molecular weight of expressed protein was estimated to be 16.83 kDa. Conclusion: In this study, Human IL-1RA was successfully produced in E. coli Origami with high quantity other than the rest of E. coli strains. Therefore, E. coli BL21 Origami (DE3) can be used as the suitable host for production of recombinant IL-1RA, and this technology has a potential for localization.