توليد آزمايشگاهي فرم فعال ايمونوتوكسين هدف‌گذاري شده برعليه گيرنده فاكتور محرك رشد كلوني گرانولوسيت

هدف: هدف از مطالعه‌ي حاضر، توليد پروتئين نوتركيب هيبريدي DT389GCSF به فرم فعال محلول در باكتري E. coli Bl21(DE3) ، تخليص و ارزيابي سميت سلولي آن مي‌باشد. مواد و روش‏ها: پروتئين DT389GCSF، با دنباله‌ي 6 هيستيدين در باكتري E. coli BL-21(DE3)  در دماي 28 درجه سانتيگراد به ‏فرم محلول بيان شد. سپس از طريق ستون كروماتوگرافي تمايلي نيكل سفاروز تخليص شد. در نهايت عملكرد پروتئين نوتركيب خالص شده با استفاده از آزمون  TTM  بر روي سلول سرطاني 06LH مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: ميزان بيان و خلوص پروتئين DT389GCSF با استفاده از نرم‌افزار Image J، به‏ترتيب در حدود 12 و 80 درصد تخمين زده شد. ميزان IC50 پس از 48 ساعت قرارگيري پروتئين DT389GCSF در معرض رده‌ي سلولي، در حدود 0.000019±0.00017 مولار بود. نتيجه‏گيري: با كاهش دما و استفاده از مكانيسم درون سلولي، مي‌توان بازتاخوردگي پروتئين هيبريدي DT389GCSF را به‏ شكل مناسب و به ‏فرم فعال مشاهده نمود. در نتيجه در مراحل توليد آزمايشگاهي ايمونوتوكسين‏هاي مربوطه مي‏توان با استفاده از اين روش، از مراحل توليد به ‏صورت اينكلوژن‌بادي صرف‏نظر كرد.