بررسي مولكولي ژن هاي clbS و clbA در باكتري هاي E .coli جدا شده از بافت هاي توموري كولوركتال

Molecular Study of clbS and clbA genes in the E.coli bacteria isolated from tissue of patients with colorectal cancer

يكي از مهمترين عوامل در ايجاد سرطان كولوركتال، باكتريها و توكسين هاي حاصله از آنها است. برخي سويه هاي E.coli كه داراي مجموعه ژني PKS هستند، قادرند ژنوتوكسيني به نام كلي باكتين (Colibactin) را توليد كنند. كلي باكتين درباكتريهاي PKS مثبت با فعال شدن مسير سيگنالينگ، باعث آسيب به DNA و در نتيجه گسترش تومور (مانند سرطان كولوركتال) مي شود. بررسي مولكولي ژن هاي clbSو clbA ( دو ژن از ژن هاي جزيره ژني PKS) در باكتري هاي E .coliجدا شده از بافت هاي توموري كولوركتال مي باشد. مواد و روش ها: بدين منظور79 نمونه بيوپسي از بافت روده بيمار مبتلا به سرطان كولوركتال، پس از اخذ پرسشنامه و رضايت نامه تهيه گرديد. با روش هاي ميكروبي و بيوشيميايي باكتري E.coli جداسازي و شناسايي شد. سپس سويه ها از نظر وجود ژن هاي clbA وclbS با روش PCR، ارزيابي شد. يا فته ها: باكتريهاي E.coli ايزوله شده از نظر تست هاي بيوشيميايي موتيليتي، متيل رد، اندول و تي اس آي مثبت و براي تست هاي سيترات و اوره منفي بودند. نتايج آزمايش PCR نشان داد، براي ژن ويرولانس clbA از بين 79 سويه مورد بررسي، در 66.67% از افراد نرمال ، د ر40.91% از بيماران التهابي روده بزرگ و59.09% از مبتلايان به سرطان كولوركتال مثبت بود و براي ژن ويرولانس clbS در 50% از افراد نرمال و بيماران التهابي روده بزرگ و 58.62% از مبتلايان به سرطان كولوركتال مثبت بود و 27.8% نمونه ها، واجد هر دو ژن(clbA/clbS) بود. بحث: هر دو ژن clbSو clbA جزو ژن هاي ضروري جزيره ژني PKS مي باشند. با توجه به نتايج به دست آمده و اهميت كلي باكتين و رابطه آن با ايجاد سرطان كولوركتال، مطالعه كامل تر در اين زمينه ضروري به نظر مي رسد.

One of the most important factors in the development of colorectal cancer(CRC) is the bacteria and their toxins. Some strains of E. coli have the PKS gene island, which produces exotoxin called colibactin. Colibactin causes damage to the DNA and leads to the development of tumor in colorectal cancer by activating the signaling pathway. The purpose of this study was the investigation of clbS and clbA genes (two genes in the PKS Island) in E .coli isolated from colorectal tumor tissues. Materials and Methods: For this purpose, 79 biopsy samples from tissue of patients with CRC were prepared after receiving a questionnaire and consent form. By microbial and biochemical methods, these E. coli were isolated and identified and then these bacteria were evaluated for the presence of clbA and clbS genes by PCR method. Results: E.coli isolated were positive in point of biochemical tests; Motility, Indol, TSI, and MR tests and negative for Citrate and Urea tests. The molecular results showed the frequency of 66.67% , 40.91% and 59.09% for clbA in normal subjects, the patients with IBD and CRC patients respectively. Moreover the frequency of 50%, 58.62% and 27.8% for the clbS gene in normal subjects, the patients with IBD and CRC patients respectively. Also 27.8% of the samples had both genes (clbA / clbS). Discussion: Both the clbS and clbA genes are among the essential genes of the PKS Island. Considering these results and the importance of colibactin and its relation with colorectal cancer, seems the more studies in this regard is necessary.