تشخيص مولكولي باكتري سالمونلا در نمونه هاي شترمرغ‌ در استان كرمان-شهرستان سيرجان به روش PCR

Molecular detection of Salmonella bacteria isolated by PCR from ostriches samples in Sirjan district of Kerman province

سالمونلوز يكي از بيماري‌هاي مهم مشترك بين انسان و حيوان است كه پراكندگي جغرافيايي بسيار وسيعي دارد. از مهم­ترين منابع آلودگي سالمونلا در انسان سبزي‌ها، فرآورده‌هاي لبني، محصول‌هاي دريايي، مواد گوشتي به­ويژه گوشت ماكيان، تخم­مرغ و فرآورده‌هاي جانبي آن‌ها است. روش­هاي استاندارد مبتني بر كشت باكتري براي تشخيص گونه­هاي سالمونلا حساس ولي زمان­بر است. PCR از حساسيت و دقت بالايي براي شناسايي عوامل عفوني برخوردار است. ژن hilA از ژن‌هاي رمز كننده پروتئين‌هاي تنظيم كننده نسخه­برداري و از ژن­هاي با حفاظت ژنتيكي بالا است كه مي‌توان از آن در جهت شناسايي سالمونلا بهره برد. هدف از اين تحقيق، شناسايي باكتري سالمونلا در مدفوع شترمرغ‌ بر پايه وجود ژن hilA به كمك روش PCR و بررسي اختصاصيت اين روش در مقايسه با روش‌هاي متداول است. مواد و روش­ها: 500 نمونه از مدفوع شترمرغ‌هاي منطقه سيرجان كه پيش­تر براي تشخيص سويه‌هاي سالمونلايي مورد بررسي‌ كشت‌هاي افتراقي و تست‌هاي بيوشيميايي قرار گرفته بود براي آزمون حضور ژن hilA استفاده شد. DNA باكتري‌ها از نمونه‌هاي مدفوع شترمرغ‌ها بعد از حل كردن مدفوع در محيط كشت و 24 ساعت نگهداري در دماي 37 درجه سلسيوس، استخراج گرديد و به كمك PCR و استفاده از پرايمرهاي اختصاصي جهت بررسي حضور ژن hilA مورد ارزيابي قرار گرفتند. يافته­ ها: بررسي وجود ژن hilA از ميان 500 نمونه مدفوع نشان داد كه در 38 نمونه مدفوع، باكتري سالمونلا حضور دارد كه با نتايج آزمون استاندارد براي شناسايي سالمونلا مطابقت داشت. قابل ذكر است كه نتايج حاصل از بررسي ژن hilA در همان نمونه‌هايي مثبت بود كه حضور باكتري سالمونلا قبلا توسط آزمون‌هاي استاندارد تأييد گرديده بود. نتيجه­ گيري: نتايج به ­دست آمده نشان مي‌دهد كه بررسي ژن hilA با استفاده از PCR و پرايمرهاي اختصاصي مي‌تواند روشي جايگزين با سرعت و دقت بالا و هزينه به­نسبت پايين براي تشخيص باكتري سالمونلا در ميان نمونه‌هاي مدفوع پرندگان باشد. با توجه به اين‌كه شيوع عفونت‌هاي سالمونلايي در ميان پردنگان و ماكيان به­نسبت بالا است شناسايي اين عفونت‌ها با سرعت و دقت بالا اهميتي ويژه‌اي دارد. اين مطالعه نشان داد كه بررسي ژن hilA با استفاده از روش PCR مي‌تواند در اين زمينه مؤثر باشد.

Aim and Background: Salmonellosis is one of the major common human and animal diseases with wide geographical distribution. The most important sources of Salmonella infection in humans are vegetables, dairy products, marine products, meat products (especially poultry meat), and eggs and their products. Standard methods for the detection of Salmonella species are sensitive but time consuming. Therefore, faster methods in this field are required. PCR is a sensitive and specific method for identification of infectious agents. HilA as a highly protected encoding transcription regulation gene can be used for confirmation of Salmonella. The aim of this study is the identification of Salmonella bacteria in ostrich feces by investigation of hilA gene in genomic DNA using PCR and also evaluation of its specificity in comparison with other common techniques. Material and methods: 500 ostrich feces samples that have previously been investigated for Salmonella by differential-selective cultivation and biochemical tests were used for study of hilA gene presence test. DNA was extracted from feces samples after solvation of feces in culture medium and incubation in 37 ˚C for 24 hours. Then, PCR was performed by hilA specific primers to investigate presence of hilA gene. Results: The investigation of presence of hilA gene among 500 Sirjan’s ostrich feces samples showed that there are 38 feces samples infected by Salmonella which was in agreement with the results of standard tests for Salmonella. It is noteworthy to mention that hilA gene was present in those samples that Salmonella had been identified by standard tests. Conclusion: The results showed that the investigation of hilA gene by PCR using specific primers could be an alternative method for recognition of Salmonella in poultry facet with high accuracy and speed, and also low costs.