مقايسه دو روش PCR مستقيم و PCR با استفاده ازDNA استخراج شده توسط كيت در تعيين ژن هاي tst و mecA در باكتري استافيلوكوك اورئوس

مقدمه: انجام واكنش PCR يكي از دقيق ترين و حساس ترين تست ها براي سنجش هاي مولكولي مي باشد. استخراج DNA هميشه از وقت گيرترين و هزينه برترين مراحل قبل از PCR مي باشد كه با حذف آن در برخي شرايط مي توان در زمان و هزينه صرفه جويي كرد. هدف از اين مطالعه مقايسه دو روش PCR مستقيم و PCR با استخراج DNA الگو در شناسايي ژن هاي tst و mecA و femA ي باشد. روش كار: در اين بررسي ايزوله هاي باليني استافيلوكوك اورئوس با تست هاي بيوشيميايي تاييد شدند. سپس با روش هاي، PCR مستقيم از كلني هاي استافيلوكوك اورئوس كشت داده شده بر روي محيط Muller Hinton agar و PCR با DNAاستخراج شده توسط كيت استخراج براي ژنهاي tst و mecA و femAمورد ارزيابي قرار گرفت. براي اين كار از سه پرايمر اختصاصي براي ژنهاي مورد نظر استفاده شد. يافته ها: تكثير ژن هاي tst و mecA به طول bp 326 و bp 163 توسطPCR مستقيم و PCR با DNA استخراج شده با موفقيت انجام شد كه مربوط به توكسين1سندروم شوك توكسيك و مقاومت به متي سيلين مي باشند. در نهايت توسط ژنهاي مورد نظر سويه هاي مقاوم و توليد كننده توكسين شناسايي شدند. نتايج بدست آمده از نظر كمي كاملا مشابه و از نظر كيفي متفاوت بودند، كه آزمون PCR با استفاده از كيت نتايج بدست امده داراي كيفيت بهتري بود. نتيجه گيري: با توجه به نتايح بدست آمده در اين بررسي، براي صرفه جويي در وقت و هزينه در تشخيص استافيلوكوك اورئوس مي توان از PCR مستقيم استفاده كرد . كيفيت باندهاي بدست آمده در اين روش نسبت به PCR با DNA استخراج شده، قابل قبول بود و در برخي موارد مي توان از آن بعنوان يك تست تشخيصي سريع استفاده كرد. براي اينكه كيفيت كار بهتر شود بايد از روغن هاي معدني استفاده شود.