شناسايي حالت زنده اما غيرقابل‌كشت باكتري اشريشيا كلي (Escherichia coli O157:H7) با استفاده از وارونويسي واكنش زنجيره‌اي پليمراز (RT-PCR)

زمينه و هدف: باكتري هاي متعددي همانند اشريشيا كلي تحت شرايط نامساعد مي توانند وارد حالت زنده اما غيرقابل كشت (VBNC) شوند كه با روش هاي تشخيص بر پايه كشت باكتري قادر به شناسايي نيستند. در تحقيق حاضر، وارونويسي واكنش زنجيره اي پليمراز (RT-PCR) براي تشخيص باكتري Escherichia coli O۱۵۷:H۷ در حالت VBNC بررسي شد. مواد و روش كار: باكتري E. coli O۱۵۷:H۷ به تيمارهاي آب مقطر و آب نمك ۳۰درصد تلقيح و در دماي اتاق نگهداري شد. كشت پذيري باكتري ها روي محيط كشت مك كانكي آگار تعيين شد. RTPCR ژن ۱۶S rRNA شامل استخراج و تخليص RNA، تيمار DNase I براي حذف آلودگي DNA و سپس سنتز cDNA و الكتروفورز محصول PCR نمونه هاي cDNA براي تشخيص زنده ماني باكتري E. coli O۱۵۷:H۷ تحت تيمارهاي مورد مطالعه به كار رفت و با نتايج RT-PCR ژن ۱۶S rRNA در باكتري هاي كشته شده به وسيلۀ حرارت مقايسه شد.يافته ها: كشت پذيري باكتري ها در تيمار آب مقطر طي مدت مطالعه حفظ شد؛ اما تيمار آب نمك ۳۰ درصد باعث كشت ناپذيري باكتري در روز چهارم مطالعه شد. نتايج RT-PCR ژن ۱۶S rRNA بيانگر حفظ بيان اين ژن در باكتري هاي كشت پذير و غيرقابل كشت طي مدت مطالعه بود، در حالي كه در باكتري هاي كشته شده به وسيلۀ حرارت بيان اين ژن منفي بود كه نشان دهندۀ كارايي RT-PCR ژن ۱۶S rRNA در تشخيص باكتري هاي زنده از غيرزنده بود.نتيجه گيري: باكتري E. coli O۱۵۷:H۷ تحت استرس شوري ۳۰ درصد وارد حالت VBNC شد كه مي تواند باعث مخاطراتي جدي براي سلامت انسان شود. وارونويسي واكنش زنجيره اي پليمراز (RT-PCR) مي تواند براي تشخيص باكتري هاي VBNC به كار رود.