عنوان مقاله :
توليد رده نوتركيب HEK293T با بيش- بياني پايدار miR-1 به‌عنوان مدل زيستي براي مطالعات قلبي
پديد آورندگان :
راسخي ، مهسا پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري , بخشنده ، بهناز دانشگاه تهران - دانشكده علوم - گروه بيوتكنولوژي , صادقي زاده ، مجيد دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم زيستي - گروه ژنتيك , سليمي ، علي دانشگاه علوم پزشكي بقيه‌اله(عج) - مركز تحقيقات نانوبيوتكنولوژي , سليماني ، مسعود دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم پزشكي - گروه هماتولوژي
كليدواژه :
microRNA-1 , سلول‌هاي HEK293T , تمايز سلولي , تراآلايي ويروسي سلول , مدل زيستي
چكيده فارسي :
اهداف: القاي مصنوعي بيش بيان miRNA راهكار مناسبي براي القاي موثرتر تمايز سلولي است. نقش موثر miR۱ در تكوين و تمايز سلول‌هاي قلبي گزارش شده است. لنتي‌ويروس يك ناقل كارآمد براي تهيه رده‌هاي سلولي پايدار است. هدف پژوهش حاضر توليد رده سلولي با بيش بيان پايدار miR۱ براي ايجاد يك مدل زيستي براي مطالعات قلبي بود. مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربي حاضر، سلول‌هاي HEK ۲۹۳T در محيط كشت DMEM به‌همراه سرم جنين گاوي (FBS) ۱۰% و ال گلوتامين ۲ميلي‌مولار و پني‌سيلين استرپتومايسين ۱X در محيط انكوباتور كشت داده شدند. پس از كلون‌كردن ژن miR۱، كلون‌هاي نوتركيب انتخاب شدند و حضور قطعه ژني در وكتور نوتركيب با توالي‌يابي تاييد شد. وكتور حامل miR۱ به‌همراه وكتورهاي كمكي در سلولHEK۲۹۳T به‌صورت ويروس نوتركيب بسته‌بندي شد. تراآلايي سلول‌هاي HEK۲۹۳T با ويروس نوتركيب براي توليد رده پايدار انجام شد. سپس كارآيي تراآلايي و رقت موثر ويروس با نشانگر GFP سنجش شد. تغييرات بيان miR۱ با روش qPCR بررسي شد. تحليل داده‌ها از طريق بررسي مقايسه‌اي چرخه آستانه و روش Pfaffl انجام گرفت. يافته‌ها: بيشترين ميزان بيان GFP مربوط به سلول‌هاي آلوده‌شده با رقت ۱۵۰ميكرومولار بود. نشانگر فلورسنت GFP موجب تسهيل فرآيند بهينه‌سازي و تخليص سلول‌هاي نوتركيب شد. در ارزيابي qPCR، بيان miR۱ در سلول‌هاي تراآلايي شده در مقايسه با سلول‌هاي گروه كنترل افزايش قابل ملاحظه‌اي داشت. نتيجه‌گيري: رده سلولي پايدار نوتركيب HEK۲۹۳T بيش بيان‌كننده miR۱ در لنتي‌ويروس، به‌عنوان مدل زيستي مناسب براي بررسي فرآيندهاي تكامل و تكوين قلب است.
عنوان نشريه :
زيست فناوري دانشگاه تربيت مدرس
عنوان نشريه :
زيست فناوري دانشگاه تربيت مدرس
