كلونينگ و بيان فرم جهش يافته و غيرفعال توكسين بوردتلا پرتوسيس سويه بومي ايران

سابقه و هدف: سياه سرفه بيماري حاد و مسري دستگاه تنفسي به ويژه در نوزادان و كودكان و يكي از ده عامل عمده مرگ ناشي از بيماري هاي عفوني است. عليرغم كاهش ابتلا به دليل واكسيناسيون با باكتري كشته شده عامل بيماريزا (Bordetella pertussis)، افزايش بيماري در دهه اخير بيانگر باز پديدي ناشي از تنوع ژنتيكي باكتري و ناكارمدي واكسن هاي كنوني است. بنابراين طراحي واكسنهاي جديد و موثر بر پايه سويه هاي شايع هر جمعيت امري ضروري است. در اين مطالعه پروتئين نوتركيب عير فعال مهمترين آنتي ژن باكتريايي (توكسين پرتوسيس،PTX) سويه شايع بيماريزا در ايران بر پايه نسل جديد واكسنهاي غير سلولي توليد شد. مواد و روش ها: سويه باكتري مورد استفاده در اين مطالعه جهت استخراج ژنوم و تكثير ژن، از بين سويه هاي بيماريزاي جدا شده از بيماران ايراني از آزمايشگاه مرجع سياه سرفه بخش ميكروب شناسي انستيتو پاستور ايران انتخاب شده است. پس از كشت باكتري و استخراج DNA ژنوميك، قطعه ptxs1 (ناحيه فعال آنزيميPTX) تكثير و در 18pUC كلون و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي، جهش زايي هدفمند آرژنين 9 به ليزين و گلوتاميك اسيد 129 به گليسين انجام و با تعيين توالي ارزيابي شد. قطعه جهش يافته در سيستم -E.coli BL21 pET15b و جايگاههاي BamH Iota;/NdeIبا 5/0 mM IPTG القا و بيان شد. سپس توسطSDSPAGE و ايمونوبلات ارزيابي شد. خالص سازي با كروماتوگرافي تمايلي انجام و غلظت پروتئين مشخص شد.. يافته ها: جهش هاي Glu129Lys, Arg9Gly با تعيين توالي تاييد شد. وجود باند28kDa در ژل و ايمونوبلات با استفاده از آنتي باديAntiHis بيان پروتئين تاييد كرد. پروتئين به مقدارmg/ml 0/36 خالص سازي شد. نتيجه گيري: بر اساس نتايج اين مطالعه فرم غير فعال و ايمونوژن PTX سويه غالب بيماريزا در ايران مي تواند به تنهايي و يا در تركيبي با ساير آنتي ژنها جهت طراحي واكسن هاي بدون سلولي مورد استفاده قرارگيرد.