مطالعه بيان ژن ureI هليكوباكترپيلوري به روش RT-PCR

سابقه و هدف: هليكوباكترپيلوري يك ارگانيسم مارپيچي شكل و گرم منفي بوده كه عامل زخم معده است و نقش مهمي در ايجاد سرطان معده دارد. اجزاي مختلف اوره آز، از عوامل مهم براي تحريك سيستم ايمني هستند. هنوز واكسن موثري عليه اين باكتري وجود ندارد و تحقيقات در زمينه يافتن واكسن، ضروري به نظر مي رسد. هدف از تحقيق حاضر، ايجاد سازواره ژني بر اساس ژن ureI و بررسي بيان آن است. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، تكثير ژن ureI با انجام PCR روي ژنوم سويه استاندارد هليكوباكترپيلوري تهيه شده از موسسه پاستور، صورت پذيرفت. قطعه 612 جفت بازي مربوط به ureI به روش T/A cloning در پلاسميد pTZ كلون گرديد، سپس ساب كلونينگ اين ژن در پلاسميد PIRES2-EGFP انجام شد. سازواره PIRES2-EGFPureI به روش الكتروپوريشن به سلول هاي جانوري CHO منتقل و بيان يوكاريوتي ژن ureI با تكنيك RT-PCR بررسي گرديد. يافته ها: كلونينگ قطعه 612 جفت بازي ژن ureI در دو ناقل pTZ و PIRES2-EGFP با استفاده از تكنيك هاي PCR، هضم آنزيمي توسط SacI و EcoRI و تعيين توالي تاييد گرديد. پس از انجام RT-PCR روي سلول هاي CHO ترانسفرم شده، باند مربوط به ژن ureI تشكيل شد. نتيجه گيري: وكتور نوتركيب PIRES2-EGFPureI، قدرت بيان ژن ureI را دارد. بيان موفق اين ژن در سلول هاي جانوري، مي تواند در جهت بررسي ايمني زايي در حيوانات آزمايشگاهي به عنوان يك واكسن نوتركيب مد نظر قرار گيرد.