ايمني زائي نانوذرات PLGAواجد پروتئين نوتركيب CfaB از اشريشيا كولي انتروتوكسيژنيك

سابقه و هدف: باكتري اشريشيا كولي انتروتوكسيژنيك، از عوامل شايع اسهال مي باشد. با بروز مقاومت آنتي بيوتيكي، ساخت ايمنوژن موثر عليه باكتري ضروري است. فاكتورهاي كلونيزاسيون از مهمترين كانديداي واكسن عليه ETEC مي باشند. بارگذاري ايمنوژن هاي نوتركيب از جمله فاكتورهاي كلونيزاسيون در نانو حاملها، سبب محافظت آنها در برابر عوامل محيطي شده، غلظتهاي مناسب از ايمونوژن را فراهم و فعاليت زيستي را افزايش مي دهد. هدف از اين تحقيق بررسي ايمني زائي پروتئين CfaB بارگذاري شده در نانوذرات PLGA مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، بهينه سازي كدوني ژن cfaB با نرم افزار OPTIMIZER انجام شد. بيان پروتئين در E.coli با IPTG القا گرديد. پروتئين به روش كروماتوگرافي ميل تركيبي تخليص و با وسترن بلاتينگ ارزيابي شد. نانوذراتPLGA به روش امولسيون دوگانه تهيه و خصوصيات ساختاري با SEM و DLS بررسي گرديد. ايمن سازي 40 موش BALB/C در چهار گروه 10 تايي انجام شد و به گروه اول 20 ميكروگرم از پروتئين بارگذاري شده در نانوذره، گروه دوم پروتئين به همراه ادجوانت فروند و گروه سوم و چهارم به ترتيب نانوذرات بدون آنتي ژن و بافر PBS تجزيه شد. تزريقات با فاصله دو هفته اي و چهار بار انجام شد و يك هفته پس از تزريقات خونگيري از چشم حيوانات انجام شد و تيتر آنتي بادي با روش الايزا تعيين گرديد. ممانعت سرم از اتصال باكتري ETEC به سلول Caco2 بررسي شد. يافته ها: ژن بهينه سازي شده شاخص سازگاري كدون 0/85 را دارا شد. بيان پروتئين منجر به توليد CfaB با وزن 18/9 كيلودالتون شد. ميزان پروتئين 5 ميلي گرم در ليتر بود. ظرفيت بارگذاري پروتئين در نانوذرات PLGA، 85 درصد بود. متوسط اندازه نانوذرات 170 نانومتر بود. ايمن سازي موشها پاسخ آنتي بادي سرمي را القا كرد. سرم ايمن اتصال ETEC به سلول Caco2 را 62/8% كاهش داد. نتيجه گيري: نتايج مطالعه نشان داد كه پروتئين نوتركيب CfaBبارگذاري شده در نانوذرات PLGA ايمني عليه باكتري ETECرا تحريك مي كند.