بهينه‌سازي انجماد شيشه‌اي تخمك گوسفندي از طريق كاهش كلسيم با افزودن EGTA به محلول انجمادي

اهداف: در فرآيند انجماد شيشه‌اي، كلسيم داخل سلولي تحت تاثير مواد محافظ انجماد افزايش و توانايي تكوين تخمك كاهش مي‌يابد. مطالعه حاضر با هدف كاهش كلسيم محيط پايه انجماد به‌منظور بهبود ميزان لقاح و توانايي تكوين تخمك انجام شد.مواد و روش‌ها: مجموعه تخمك و سلول‌هاي كومولوسي از تخمدان گوسفند جمع‌آوري و پس از ۲۴ ساعت كشت در محيط بلوغ، تخمك‌هاي متافاز II به پنج گروه شامل يك گروه كنترل (غيرانجمادي) و چهار گروه انجمادي تقسيم شدند. گروه‌هاي انجمادي براساس حضور يا عدم حضور اتيلن‌گليكول‌تترااستيك‌اسيد (EGTA) و كلسيم در محيط پايه طراحي شدند. به اين منظور از چهار نوع محيط پايه شامل فسفات‌بافرسالين با و بدون كلسيم، همچنين فسفات‌بافرسالين داراي EGTA، با و بدون كلسيم استفاده شد. پس از ذوب، ميزان لقاح و تكوين جنين تا تشكيل بلاستوسيست اندازه‌گيري شد. كيفيت بلاستوسيست با استفاده از رنگ‌آميزي افتراقي و تجزيه و تحليل آماري داده‌ها با استفاده از آناليز واريانس يك‌طرفه انجام شد.يافته‌ها: بين گروه‌هاي انجمادي از لحاظ ميزان زنده‌ماني تفاوت معني‌داري وجود نداشت. ميزان لقاح در محيط فاقد كلسيم بالاتر از ساير گروه‌هاي انجمادي (۰/۵۵±۶۸/۸۱ و ۰/۶۷±۶۷/۷۷، به ترتيب در حضور و عدم حضور EGTA) بود. در محيط فاقد كلسيم و حاوي EGTA تكوين جنين ۳ و ۵روزه، به ترتيب ۱/۳۸ ۵۳/۶۵± و ۲/۸۵±۴۶/۲۱ نسبت به ساير گروه‌هاي انجمادي بالاتر بود (P 0/05). شمارش سلولي بلاستوسيست تفاوت معني‌داري بين گروه‌هاي انجمادي و گروه كنترل نشان نداد.نتيجه گيري: استفاده از سيستم انجمادي بدون كلسيم از طريق افزودن EGTA مي‌تواند سبب بهبود كيفيت تخمك بالغ گوسفندي پس از انجماد و بهبود تكوين جنين‌هاي حاصل شود.