بررسي مورفولوژي و ايمونوفنوتيپ سلولهاي بنيادي مزانشيمي بعد از تعويض سرم گاوي محيط كشت به سرم انساني

مقدمه: سلولهاي بنيادي مزانشيمي ( MSC ) براي مقاصد سلول درماني مورد استفاده قرار مي گيرند. سرم جنين گاوي (FBS) براي رشد سلولهاي بنيادي در محيط كشت ضروري مي باشد. از آنجائيكه ممكن است FBS واكنشهاي ايمونولو يك را در افراد گيرنده MSC تحريك كند و يا باعث انتقال عوامل پاتو ژن يك گردد. لذا در موارد باليني بايستي FBS از سلولها حذف گردد. اين مطالعه مشخصات سيتولوژيك و فلوسيتومتريك سلولهاي بنيادي مشتق از چربي( ASCs) را در مديومهاي حاوي FBS، سرم انساني و جايگزيني FBS با سرم انساني و برعكس مورد ارزيابي قرار خواهد داد. مواد و روشها: سلولهاي بنيادي مشتق از چربي بعد از جداسازي كشت داده شدند. جهت بررسي سيتولوژيك سلولهاي پاساژ دوم بر روي لامل كشت داده شدند و بعد از فيكساسيون با هماتوكسيلين و ائوزين رنگ شدند. سلولهاي پاساژ دوم با آنتي بادي هاي CD44 و CD90 رنگ آميزي زمينه و هدف: سلول هاي بنيادي مزانشيمي (Mesenchymal Stem CellsMSC) براي مقاصد سلول درماني مورد استفاده قرار مي گيرند. سرم جنين گاوي (Fetal Bovine SerumFBS) براي رشد سلول هاي بنيادي در محيط كشت ضروري مي باشد. از آنجايي كه ممكن است FBS واكنش هاي ايمونولوژيك را در افراد گيرنده MSC تحريك كند و يا باعث انتقال عوامل پاتوژنيك گردد، لذا در موارد باليني بايستي FBS از سلول ها حذف گردد و با سرم انساني جايگزين گردد. اين مطالعه مشخصات سيتولوژيك و فلوسيتومتريك سلول هاي بنيادي مشتق از چربي (ASCs Adipose Tissue Stem Cells) را در مديوم هاي حاوي FBS، سرم انساني و جايگزيني FBS با سرم انساني و برعكس مورد ارزيابي قرار داده است. روش كار: سلول هاي بنيادي مشتق از چربي بعد از جداسازي كشت داده شدند. جهت بررسي سيتولوژيك سلول هاي پاساژ دوم بر روي لامل كشت داده و بعد از فيكساسيون با هماتوكسيلين و ائوزين رنگ شدند. سلول هاي پاساژ دوم با آنتي بادي ها مثبت و منفيCD44 ، CD90 براي سلول هاي بنيادي، CD45 و CD11 رنگ آميزي شده و مورد ارزيابي قرار گرفتند. يافته ها: سلول هاي بنيادي تكثير يافته در FBS شكل پهني داشته و به كندي تكثير پيدا كردند در حالي كه سلول هاي داراي سرم انساني دوكي شكل بود و به سرعت رشد مي كردند. تعويض سرم از FBS به سرم انساني باعث تغيير شكل سلول ها از پهن به دوكي گرديد. در نتايج forward scatter سلول هاي بنيادي كشت داده شده در FBS به طور معني داري بزرگ تر از ساير گروه ها بودند (05/0 p lt;). تفاوت معني داري در بيان ماركرهاي ايمونوفنوتيپيك مثبت و منفي مشاهده نشد. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان دهنده اين است كه سرم انساني، شرايط كشت سلول هاي بنيادي مزانشيمي را در مقايسه با مديوم حاوي FBS قابل دسترس تجاري ، بهبود مي بخشد. تعويض FBS به سرم انساني روش مفيد براي سلول هاي بنيادي خواهد بود كه قبلاً در FBS كشت داده شده و يا فريز گرديده اند. ده و مورد ارزيابي قرار گرفتند. نتايج: سلولهاي بنيادي تكثير يافته در FBS شكل پهني داشته و به كندي تكثير پيدا كردند در حاليكه سلولهاي داراي سرم انساني دوكي شكل بود و به سرعت رشد مي كردند. تعويض سرم از FBS به سرم انساني باعث تغيير شكل سلولها از پهن به دوكي گرديد. در نتايج forward scatter سلولهاي بنيادي كشت داده شده در FBS بطور معني داري بزرگتر از ساير گروهها بودند(p lt;0.05). تفاوت معني داري در بيان ماركرهاي ايمونوفنوتيپيك مثل CD44, CD90 مشاهده نشد. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشاندهنده اين است كه سرم انساني، شرايط كشت سلولهاي بنيادي مزانشيمي را در مقايسه با مديوم حاوي FBS قابل دسترس تجاري، بهبود مي بخشد. تعويض FBS به سرم انساني روش مفيد براي سلولهاي بنيادي خواهد بود كه قبلاً در FBS كشت داده شده و يا فريز گرديده اند.