ايجاد يك روش نوين آزمايشگاهي الايزا توبي (ToBi Assay) براي تعيين پوتنسي واكسن بومي توكسوييدي كزاز درايران

زمينه و هدف: يكي از كاربردهاي اصلي استفاده از حيوانات آزمايشگاهي به روش in vivo در مراكز توليد واكسن در تست هاي كنترل كيفي (كارائي: Potency) است كه اخيرا به دليل مشكلات خاص در استفاده از حيوانات آزمايشگاهي جايگزيني اين آزمون به روش in vitro ارائه شده است. تست مهار سازي اتصال توكسين (Toxin Binding Inhibition ToBi ) يكي از اين روش ها است كه بر مبناي مهار اتصال توكسين به آنتي توكسين متصل به پليت الايزا است. از اهداف اصلي در اين پژوهش بررسي روش فوق براي تعيين كارايي توكسوئيد كزاز و مقايسه آن با آزمون خنثي سازي سرم (Serum Neutralization Test, SN) است. جايگزين نمودن استفاده از آزمون الايزا (in vitro) بجاي استفاده از آزمون هاي چالش challenge و يا آزمون خنثي سازي سرم (SN) در كنترل كيفي واكسن كزاز، و جايگزيني اين روش به عنوان يك روش استاندارد و پيشنهاد شده توسط كميسيون اروپايي فارماكوپه و WHO، از اهداف مهم پژوهش حاضر است. روش كار: در اين روش گروهي از موش هاي آزمايشگاهي نژاد (NIH) را بوسيله رقت هاي مناسب از واكسن توليد موسسه رازي و واكسن مرجع توكسوئيد كزاز (NIBSC) ايمن نموده و پس از خون گيري و جداسازي سرم، عيار واكسن (كارايي) به روش الايزا (in vitro) سنجيده شد. براي انجام آزمون خنثي سازي سرم (SN) نيز خوكچه هاي هندي را با نيمي از دز مورد استفاده در مطالعات انساني ايمن نموده و جهت انجام تست ToBi رقت هاي مختلف از سرم تهيه شد كه با مقادير متفاوتي از توكسين كزاز مجاور گرديد. مخلوط حاصل پس از طي دوره نگهداري در گرمخانه 37 درجه سلسيوس، در پليت الايزا كد شده وبا آنتي تتانوس ايمونوگلوبينHorse anti tetanus IgG) ( اسبي منتقل ,با افزودن Anti T IgG، نشاندار شده با HRP، ميزان توكسين آزاد سنجيده شد. يافته ها: نتايج بدست آمده از روش مهار سازي اتصال توكسين (ToBi) با روش SN مقايسه گرديدند. دامنه نتايج عيار توكسوئيد كزاز از IU/ml 8/3-1/8 متغير بودند. با استفاده ازروش آزمون آماري Parallel line analysis اين نتايج اختلاف معني داري را نشان ندادند (P 0/05). نتيجه گيري: نتايج حاصل نشان داد كه استفاده از اين روش امكان ارزيابي واكسن هاي با عيار پائين راهم ممكن مي سازد. در نتيجه مي توان اين روش را نسبت به آزمون هاي معمول مانند خنثي سازي سرم و آزمون چلنج واكسن (Challenge Test) داراي مزاياي بيشتري از جمله كاهش استفاده از حيوانات آزمايشگاهي، ملاحظات اخلاقي و صرفه جوئي در زمان و هزينه دانست.