ارزيابي و مقايسه تيتر آنتي بادي عليه پروتئين هاي نوتركيب منفرد، مخلوط و كايمر CTXB، TCPA و CTXB-TCPA

زمينه و هدف: وبا به عنوان بيماري اسهالي يكي از مهم ترين علل مرگ و ناتواني در افراد جوامع مختلف به شمار مي رود. فاكتور كلونيزاسيون پيلي tcpA و توكسين كلرا مهم ترين فاكتورهاي بيماري زايي ويبريوكلرا مي باشند. زير واحد B سم كلرا (ctxB) و tcpA توانايي القاي پاسخ هاي ايمني را دارند. ﻫﺪف از ايﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ، ﺗﻮﻟﯿﺪ پروتئين هاي نوتركيب CTXB ، TCPA و CTXB-TCPA و مطالعه ايمني زايي و مقايسه تيتر آنتي بادي كايمر، مخلوط و جداگانه پروتئين ها ي نوتركيب در موش بود. روش كار: در اين مطالعه تجربي، ژن هايctxB ،tcpA و كايمر ctxBtcpA در وكتورهاي بياني (+) pET28a و (+) pET32a همسانه سازي و پلاسيمدهاي نوتركيب به coli BL21 DE3. E منتقل شدند. بيان پروتئين هاي نوتركيب با IPTG القا و با روش SDSPAGE و وسترن بلاتينگ بررسي شد. جهت تخليص پروتئين نوتركيب از كروماتوگرافي تمايلي Ni-NTA استفاده شد. ايﻤن سازي موش ها ﺑﻪ روش درون صفاقي و زير پوستي انجام شد. ﺗﯿﺘﺮ آنتي بادي در سرم موش هاي ايمن شده ﺑﺎ روش اﻻيﺰا ﻣﻮرد ارزيﺎﺑﯽ ﻗﺮار گرفت. يافته ها: آناليز SDS PAGE و وسترن بلاتينگ، بيان و تخليص پروتئين هاي نوتركيب را تائيد كرد. ميزان پروتئين هاي خالص شده CTXB، TCPA و CTXBTCPA به ترتيب 15.570، 11.533 و 33.100 ميلي گرم در ليتر بود. نتايج الايزا نشان داد كه ايمني زايي موش ها به خوبي صورت پذيرفته است. تفاوت معني داري در تيتر آنتي بادي عليه آنتي ژن ها ي CTXB-TCPA و مخلوط TCPA با CTXB وجود نداشت. همچنين ﺗﻔﺎوت معني داري در ﺗﯿﺘﺮ آنتي بادي حاصل از تزريق درون صفاقي و زيرپوستي مشاهده نشد. نتيجه گيري: اﺧﺘﻼف جزئي در ﺗﯿﺘﺮ آنتي بادي پروتئين ها ﻣﻤﮑﻦ اﺳﺖ ﺑﻪ ﻃﻮل ﻋﻤﺮ سلول هاي ﺧﺎﻃﺮه ﺣﺎﺻﻠﻪ در ايﻦ گروه ها و همچنين روش تزريقي آن ها ارﺗﺒﺎط داشته باشد. با توجه به مزيت هاي پروتئين هاي كايمر، CTXB-TCPA مي تواند جايگزين مناسبي براي مخلوط پروتئين ها جهت تحريك سيستم ايمني باشد.