كلونينگ و بيان دومين III پروتئين پوششي ويروس دنگي نوع 2 در باكتري E. coli

مقدمه: هدف اين مطالعه بيان آنتي ژن نوتركيبي از پروتئين پوششي ويروس دنگي، به منظور دست يابي به بيان بيشتر و به شكل محلول بود. بنابراين، قابليت بيان دومين III اين پروتئين در ميزبان باكتريايي بررسي گرديد. روش ها: هم رديفي توالي هاي مختلف دومين III با استفاده از نرم افزار Megalign انجام شد. پيش بيني ساختار پروتئين با نرم افزار Modeller و بهينه سازي توالي ژن براي بيان در E. coli با نرم افزار Optimizer صورت گرفت. سنتز و كلونينگ ژن در حامل pET21a و بهينه سازي بيان پروتئين نوتركيب در E. coli انجام شد. براي تخليص پروتئين از ستون هاي كروماتوگرافي Ni-NTA استفاده گرديد. كارايي بيان پروتئين با روش هاي الكتروفورز و لكه گذاري وسترن بررسي شد. يافته ها: يك توالي مورد توافق براي دومين III پروتئين پوششي سروتيپ 2 ويروس دنگي، ايجاد شد. ويژگي هاي ساختاري پروتئين هدف با استفاده از روش هاي بيوانفورماتيكي ارزيابي شد. با هدف دستيابي به بيان بالا، توالي ژن از لحاظ الگوي به كارگيري كدون و درصد GC بهينه سازي گرديد. توالي ژن هدف با استفاده از روش هاي توالي يابي و هضم آنزيمي مورد تاييد قرار گرفت. به منظور ايجاد پيوند دي سولفيدي در ساختار پروتئين، از ميزبان بياني Origami (DE3) استفاده شد. در نهايت بهينه سازي شرايط بيان پروتئين هدف انجام شد و غلظت مناسبي از پروتئين نوتركيب به صورت محلول به دست آمد. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه بهينه سازي توالي دومين III منجر به توليد محصول پروتئيني با غلظت بالا (20 ميلي گرم در ليتر محيط كشت) گرديد. اين سيستم بياني مي تواند جهت توليد دومين III پروتئين پوششي ويروس دنگي استفاده شود.