شناسايي ايزوله‌هاي باليني مايكوباكتريوم‌هاي غير توبركلوزيس شايع اصفهان با روش PCR-RFLP analysis ژن rpoB

مقدمه: مطالعه جهت تشخيص جنس مايكوباكتريوم، معياري را براي بررسي اپيدميولوژي و پاتوژنز اين گروه از باكتري‌ها در نواحي جغرافيايي مختلف فراهم مي‌كند. با توجه به شيوع عفونت‌هاي ناشي از مايكوباكتريوم در ايران و همچنين همسايگي ايران با دو كشور افغانستان و پاكستان كه در زمره‌ي 22 كشور High burden دنيا هستند، ضرورت توجه بيش از پيش به اين بيماري و ارايه‌ي مولكولار اپيدميولوژي بيماري‌هاي مايكوباكتريال روشن مي‌گردد. PCR-RFLP analysis (PRA يا Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis) يك روش دقيق و ارزان مي‌باشد كه تشخيص گونه‌هاي‌ مايكوباكتريوم را فراهم مي‌‌آورد. اين مطالعه با هدف تعيين پروفايل قطعات محدود شونده با استفاده از روش پيش‌گفته براي مشخص نمودن تايپ‌هاي شايع مايكوباكتريوم‌هاي غير توبركلوزيس اصفهان انجام گرديد. روش‌ها: 34 ايزوله‌ي باليني پس ازگردآوري و كشت توسط روش فنوتيپي تشخيص داده شدند. يك قطعه‌ي bp 360 از ژن rpoB با روش PCR (Polymerase chain reaction) تكثير گرديد و سپس محصولات PCR تحت تأثير دو آنزيم MspI (Moraxella sp.) و HaeIII (Haemophilus aegyptius bacteria) قرار گرفتند. قطعات حاصل از هضم توسط آنزيم با استفاده از ژل متافور آگارز 4 درصد الكتروفورز شدند و مورد آناليز قرار گرفتند. يافته‌ها: در بين 34 گونه NTM (Nontuberculous mycobacteria) مورد بررسي تايپ I مايكوباكتريوم فورچئيتوم با فراواني 82.35 درصد بيشترين نمونه‌ي جدا شده از مجموعه‌ي نمونه‌هاي باليني اين منطقه بود و پس از آن، مايكوباكتريوم كانزاسي تايپ I و مايكوباكتريوم گوردونه تايپ I هر دو با 5.88 درصد و مايكوباكتريوم گوردونه‌ي تايپ II و مايكوباكتريوم اينتراسلولار با 2.94 درصد جدا گرديدند. نتيجه‌گيري: روش PRA rpoB gene به كار گرفته شده جهت تشخيص گونه‌هاي مايكوباكتريوم، نتايج معتبري را با توجه به نتايج ديگر مطالعات، در اين منطقه‌ي جغرافيايي ارايه نمود. الگوي PRA گونه‌هاي‌ مايكوباكتريوم‌ كانزاسي‌ ساب تايپ I (60.175/30.40 MspI:، 90.205 HeaIII:) و مايكوباكتريوم اويوم (80.105/40 MspI:، 270 HeaIII:) حاصل از اين مطالعه با الگوي به دست آمده از بعضي مطالعات، يكسان بود؛ اما با پروفايل تعدادي ديگر همسان نبود. اين روش، توانست 100 درصد ايزوله‌هاي مايكوباكتريوم غير توبركلوزيس را شناسايي كند.