توليد پروكاريوتي پروتئين 2M ويروس آنفلوانزا در اتصال با پروتئين شوك حرارتي ليشمانيا ماژور به منظور دستيابي به يك واكسن كارآمد

مقدمه: ويروس‌هاي آنفلوانزا عامل عمده‌ي بيماري و مرگ و مير ناشي از بيماري‌هاي تنفسي در جهان به شمار مي‌روند و واكسيناسيون، بهترين راه پيشگيري مي‌باشد. به علت تغييرات آنتي ژنيك ويروس آنفلوانزا، بازآرايي هر ساله‌ي واكسن اجتناب ناپذير است. يكي از روش‌هاي مقابله با اين مشكل، طراحي واكسن با استفاده از آنتي ژن‌هاي حفاظت شده‌ي ويروس آنفلوانزا است. پروتئين 2M كه در پوشش ويروس، كانال يوني را تشكيل مي‌دهد و با تغييرات pH باعث ورود ويروس و ايجاد عفونت در سلول‌هاي ميزبان مي‌شود، در بين همه‌ي ويروس‌هاي آنفلوانزاي A حفاظت شده است و هدف مناسبي براي توليد واكسن با ايمني وسيع‌الطيف مي‌باشد. در اين مطالعه، به منظور توليد يك واكسن كارآمد، بخشي از ژن 70HSP (70Heat shock proteins) ليشمانيا ماژور به ژن 2M ويروس آنفولانزاي 1N1H/A متصل شد و پروتئين نوتركيب كايمر در سيستم پروكاريوتي بيان گرديد. روش‌ها: براي ساخت سازه‌ي بياني، ابتدا ژن كد كننده‌ي HSP در پلاسميد a28pET در بين محل اثر آنزيم‌هاي BamHI و HindIII جاي‌سازي گرديد. سپس ژن 2M به روش PCR (Polymerase chain reaction) و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي، تكثير يافت و در محل اثر سايت آنزيمي BamHI در وكتور خطي و دفسفريله شده‌ي a28pET و در بالادست ژن 70HSP كلون گرديد. پس از تعيين ترادف و تأييد صحت كلونينگ، بيان پروتئين نوتركيب در سلول‌هاي 21BL مورد بررسي قرار گرفت. يافته‌ها: نتايج كلني PCR و هضم آنزيمي، صحت سازه‌هاي نوتركيب را تأييد كردند. نتايج تعيين توالي نشان داد كه ژن 2Mدر وكتور a28pET و در بالادست ژن 70HSP به طور صحيح و در قاب خواندني دنباله‌ي هيستيديني كلون شده است. توليد پروتئين‌هاي نوتركيب به روش وسترن بلات (Western blot) تأييد گرديد. نتيجه‌گيري: پروتئين‌هاي شوك حرارتي توانايي تحريك و ايجاد هر دو نوع ايمني ذاتي و اكتسابي را دارند و اتصال آن به آنتي ژن هدف باعث افزايش پاسخ‌هاي ايمني مي‌شود. پروتئين كايمر تهيه شده در اين مطالعه، پس از تخليص مي‌تواند به عنوان يك كانديداي واكسن زير واحدي مناسب براي پيشگيري از عفونت آنفلوانزا در نظر گرفته شود. براي بررسي اثرات ادجوانتي 70HSP ليشمانيا ماژور بر روي پروتئين 2M، ارزيابي ايمونوژنيسيتي آن در مدل‌هاي حيواني در مطالعات آتي انجام خواهد شد.