تاثير سرم جنين گاوي بر رشد سلول‌هاي خوني لاروهايHelicoverpa armigera، Anagasta kuehniella و Arge ochropus در محيط كشت سلولي400 Ex-cell

Effect of fetal bovine serum on the hemocytes growth of Helicoverpa armigera, Anagasta kuehniella and Arge ochropus in Ex-cell 400 culture

استفاده از رده­هاي سلولي حشرات براي توليد آفت­كش­هاي زيستي، پروتئين­هاي نوتركيب يا تحويل ژن، در حال گسترش است. لذا توليد رده­هاي سلولي جديد به غني­تر كردن اين فن­آوري كمك مي­كند، بنابراين هدف از تحقيق حاضر، تهيه چندين كشت اوليه از سلول­هاي خوني لاروهاي كرم غوزه پنبه Helicoverpa armigera (Hubner)، شب­پره مديترانه­اي آرد Anagasta kuehniella (Zeller) و زنبور برگ­خوار رز Arge ochropus (Gmelin) مي­باشد. سلول­هاي خوني در محيط كشت EX-cell 400 حاوي غلظت­هاي مختلف 0، 5، 10، 15 و 20 درصد سرم جنيني گاوي در دماي 28 درجه سلسيوس نگه­داري شدند. غلظت­هاي سرم جنيني بر اساس پژوهش­هاي پيشين كشت سلولي حشرات انتخاب شدند. نتايج نشان داد كه زماني كه سرم جنيني گاوي از محيط كشت حذف شد، هيچ رشد سلولي مشاهده نشد. بيشينه رشد سلول­هاي خوني لارو كرم غوزه در محيط كشت حاوي 15 درصد سرم جنيني گاوي مشاهده شد. با افزايش سرم جنيني گاوي به 20 درصد، افزايشي در رشد سلولي مشاهده نشد. بيشينه رشد سلول­هاي خوني لارو شب­پره مديترانه­اي آرد در محيط كشت با 10 درصد سرم جنيني گاوي مشاهده شد. رشد اين سلول­ها در سرم جنيني گاوي 15 و 20 درصد به­طور معني­داري كاهش يافت. با افزايش غلظت سرم جنيني گاوي، رشد سلول­هاي خوني A. ochropus نيز افزايش يافت. در نتيجه، پژوهش حاضر، حداقل غلظت سرم جنيني گاوي مورد نياز براي بيشينه رشد سلول­هاي حشرات را در محيط كشت سلولي نشان داد.

The use of insect cell lines for producing bio-pesticides, recombinant protein expression or gene delivery is increasing. Hence, the establishment of new cell lines will help to enrich this technology. Therefore, the purpose of this research is preparation of several primary cultures initiated from hemocytes of Helicoverpa armigera (Hubner),Anagasta kuehniella (Zeller) and Arge ochropus (Gmelin). The cultures were incubated in EX-cell 400 medium supplemented with 0, 5, 10, 15 and 20% concentrations of fetal bovine serum (FBS) at 28ºC. The concentrations of FBS were chosen on the basis of previous research. Results showed no growth in any of the cell lines when FBS was omitted from the medium. Maximal growth of H. armigerahemocytes was obtained with 15% FBS. There was no further increase in growth as FBS concentration was increased to 20%, Maximal growth of A. kuehniella hemocytes was obtained at 10% FBS. The growth of these cells was significantly lower at 15 and 20% FBS. As the fetal bovine serum concentration increased, A. ochropus hemocytes growth increased. In conclusion, the current investigation demonstrated the lowest concentration of FBS required for maximal growth of insect cells in vitro.