مطالعۀ آنزيمي و بيوانفورماتيكي باكتري هاي بومي كوتينازي

كوتين پليمري است كه از تراكم و اكسيدشدن اسيدهاي چرب در گياهان به وجود آمده و نقش كليدي در حفاظت از گياهان در برابر عوامل بيماري زا ايفا مي كند. كوتيناز يك آنزيم هيدرولازي است كه كوتين را تجزيه مي كند. هدف اين پژوهش استخراج كوتين سيب قرمز، بررسي فعاليت باكتري هاي توليد كنندۀ آنزيم كوتيناز در محيط LB و تحليل هاي بيوانفورماتيكي است. بدين منظور، از پوست ميوه سيب قرمز و به كمك بافر اگزالات، كوتين جداسازي شد. سپس سويه هاي توليدكنندۀ آنزيم كه قبلاً جداسازي شده اند، در داخل پليت هاي حاوي محيط كشت كوتين تلقيح داده شدند. پس از كشت اوليه، باكتري ها را در محيط LB كشت داده و به كمك سوبستراي اختصاصي پارانيتروفنول بوتيرات فعاليت كوتينازي نمونه ها سنجيده شد. به منظور انجام تحليل هاي بيوانفورماتيكي، توالي جداسازي شده شش نمونۀ باكتريايي توليدكنندۀ آنزيم كوتيناز در پايگاه هاي محاسباتي تحليل شد و درخت فيلوژنتيكي هر توالي تهيه شد. سپس، توالي آنزيمي نمونه هاي توليدكنندۀ كوتيناز بررسي و با رسم درخت فيلوژنتيكي ميزان شباهت اين توالي ها تحليل شد. نتايج نشان داد كه كوتينازهاي پروكاريوتي از يوكاريوتي جدا شده اند. در ادامه، توالي ناحيه 16S rDNA اين نمونه ها به همراه توالي نمونه هاي جديد، ارزيابي شده و روابط فيلوژنتيكي اين گونه ها تعيين شد. اين تحليل نشان داد كه توالي جديد در كنار نمونه هاي باكتريايي قرار مي گيرد؛ بنابراين، احتمالاً آنزيم كوتيناز نمونه هاي شناسايي شده، از نظر ساختار و كاركرد با آنزيم كوتيناز اين باكتري ها، ممكن است شباهت زيادي داشته باشد.