تشخيص مولكولي عامل طاعون بر اساس ژن pla

يرسينيا پستيس عامل بيماري طاعون، باسيلي گرم منفي متعلق به تيره انتروباكترياسه است. تشخيص اين ارگانيسم بر اساس روش هاي كلاسيك وقت گير، پر هزينه و خطرناك است. هدف از اين مطالعه طراحي روش TaqMan Realtime PCR براي تشخيص سريع اين باكتري بر اساس ژن pla است. در اين مطالعه واكنش Realtime PCR بر اساس ژن هدف pla بهينه سازي گشت. براي تعيين حساسيت، از ژن pla رقت هاي سريال تهيه و آخرين رقتي كه سيگنال فلورسنت توليد كرد به عنوان كم ترين حد تشخيص در نظر گرفته شد. بر اساس نتايج آزمايش تعيين حساسيت، منحني استاندار شامل مقادير Ct و تعيين كميت براي آناليز ژن هدف استفاده گرديد. ويژگي آناليتيكال روش به وسيله انجام آزمايش بر روي ژنوم تعدادي از باكتري هاي كنترل منفي ارزيابي گرديد. در اين بررسي، در نمودار تكثير ژن pla هيچ گونه تكثيري براي نمونه هاي كنترل منفي مشاهده نشد و ويژگي واكنش تاييد گشت. كم ترين حد تشخيص روش Realtime PCR براي ژن هدف fg 4/5، همچنين كم ترين تعداد كپي از ژن هدف در يك واكنش 20 ميكروليتر در حدود 3 10 × 1 تعيين گشت. .