مقايسه سه روش رنگ آميزي مختلف براي توصيف مورفومتريك اسپرم آلپاكا (Vicugna pacos) با استفاده از سيستم ISAS® CASA-Morph

مورفومتري اسپرم بخشي از آناليز مايع مني مبتني بر فناوري CASA است و نقش مهمي در پيش­ بيني باروري مردان نشان داده است. اين آناليز برپايه استفاده از تكنيك هاي مختلف رنگ ­آميزي است، اگرچه نشان داده شده است كه رنگ ­آميزي مي تواند تغييرات چشمگيري در مورفومتري سلول در گونه­ هاي مختلف ايجاد كند. هدف از اين مطالعه، بررسي تفاوت‌هاي موجود در مورفومتري اسپرم درآلپاكا بود كه با استفاده از تكنيك ­هاي مختلف رنگ ­آميزي انجام شد. يك انزال ازهريك از پنج آلپاكاي بالغ مورد استفاده قرار گرفت. نمونه­ ها با استفاده از روش جراحي مجراي دفران جمع‌آوري شدند. سه روش رنگ­ آميزي (يعنيHemacolor ، Harri’s Henatoxylin و Diff-Quik) مورد بررسي قرار گرفت. تجزيه و تحليل مورفومتريك با استفاده از سيستم ISAS® v1 CASA-Morph، با بزرگنمايي 100x و ميكروسكوپ زمينه روشن و يك دوربين فيلمبرداري ديجيتالي با وضوح نهايي 08/0 ميكرومتر بر پيكسل انجام شد. تقريباً تعداد 200 سلول به صورت تصادفي از هر نمونه انتخاب شد وانتخاب تكنيك رنگ ­آميزي با توجه به اهميت پارامترهاي اندازه سر اسپرم وبخش مياني انتخاب شد. بين تكنيك ­هاي به كار رفته تقريباً كليه پارامترها در سطوح متفاوت تفاوت­ هايي را از خود نشان دادند. به طور كلي، سلول­ هايي كه سر بزرگ داشتند با تكنيك Harri’s Henatoxylin و آن‌هايي كه داراي سر كوچك بودند با Diff-Quik رنگ آميزي شدند. پارامترهاي تفكيك كننده براي تمايز بهتر بين حيوانات، عرض سر، سطح و درصد آكروزوم بود. در نتيجه، مانند ساير گونه ها، نتايج مورفومتري اسپرم آلپاكا نيز به تكنيك رنگ ­آميزي به كاررفته، حساس بود. اين دلالت بر لزوم ذكر واضح و دقيق تكنيك رنگ ­آميزي استفاده شده در هر مورد براي انجام مقايسه بين مطالعات مختلف روي گونه­ هاي مشابه دارد. هيچ يك از تكنيك ­هاي به كار گرفته شده برتر از سايرين نبود. علاوه بر اين، روشي كه براي به دست آوردن نمونه­ ها استفاده شد، سودمندي و سادگي آن را براي نمونه برداري­ هاي مكرر نشان داد.