بيان و تخليص ناحيه‌ي كينازي پروتئين نوتركيب گيرنده‌ي عامل رشد فيبروبلاستي نوع 2b و بررسي تغييرات ساختاري آن بر اثر برهم‌كنش آن با گاليك اسيد

مقدمه: گيرنده‌ي‏ عامل رشد فيبروبلاستي 2b (FGFR2b يا Fibroblast growth factor receptor 2b) در مسير پيام‏رساني سلولي و تنظيم فرايندهاي مهم زيستي نظير تمايز و تكثير سلولي نقش اساسي دارد. تغييرات ژنتيك نظير جهش نقطه‏اي در ناحيه‌ي تيروزين كينازي FGFR2b با سرطان پستان، تخمدان و پروستات در ارتباط است. اين مطالعه، به منظور بيان و خالص‏سازي مقدار مناسبي از ناحيه‌ي كينازي FGFR2b انساني و بررسي تغييرات ساختاري آن با گاليك اسيد انجام شد. روش‌ها: بيان پروتئين نوتركيب با استفاده از IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) 1 ميلي‏مولار در دماي 37 درجه‌ي سانتي‌گراد القا و با استفاده از الكتروفورز روي ژل پلي‏آكريلاميد در حضور سديم دودسيل سولفات (Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis يا SDS-PAGE) ارزيابي شد. پروتئين بيان شده با استفاده از كروماتوگرافي ميل تركيبي خالص شد و فعال بودن نمونه‌ي پروتئين بعد از دياليز بررسي شد. طيف فلوئورسانس و دناتوراسيون شيميايي پروتئين خالص شده، در حضور غلظت‌هاي مختلف گاليك اسيد سنجيده شد. يافته‌ها: بررسي SDS-PAGE قبل و بعد از القا شدن نشان داد كه پروتئين بيان شده در دماي 20 درجه‌ي سانتي‌گراد محلول است. همچنين، تأييد كرد كه پروتئين خالص شده است. بررسي طيف‌سنجي فلوئورسنس، افزايش شدت نشر را با افزايش تدريجي غلظت گاليك اسيد نشان داد. دناتوراسيون شيميايي ساختار سوم زير واحدهاي ناحيه‌ي كينازي را در حضور گاليك اسيد تغيير داد. نتيجه‌گيري: با توجه به يافته‌ها، ناحيه‌ي‏ كينازي گيرنده‏‌ي نوتركيب عامل رشد فيبروبلاستي 2b كه يك پروتئين 38 كيلودالتوني است، توليد و خالص گرديد. تغييرات ساختار سوم دومين كينازي، موجب ناپايدار شدن آن در حضور گاليك اسيد گرديد. اين ناپايداري در سطح مولكولي، مي‌تواند موجب اختلال در مسير پيام‌ساني سلول شود.