كلونينگ و بيان پروتئين كوتاه شده‌ي گيرنده‌ي عامل رشد اپيدرمي -1 در ميزبان مخمر Pichia pastoris

مقدمه: گيرنده ي عامل رشد اپيدرمي (EGFR يا Epidermal growth factor receptor) در پاتوفيزيولوژي طيف وسيعي از تومورهاي جامد نظير گليوبلاستوما و سرطان پستان نقش اساسي بازي مي كند. بنا بر اين، مسدود كردن آبشار پيام رساني اين گيرنده توسط آنتي بادي، هدف مناسبي براي درمان اين سرطان ها مي باشد. اولين قدم در مسير ساخت آنتي بادي هاي منوكلونال توليد پروتئين نوتركيب با خلوص بالا و الگوي گليكوزيلاسيون مشابه پروتئين انساني است. مخمر Pichia pastoris، يكي از بهترين ميزبان هاي در دسترس براي اين منظور مي باشد. روش ها: توالي كد كننده ي دومين خارج سلولي و بين غشايي پروتئين EGFR از رده ي گليوماي انساني (A172) با استفاده از تكنيك (RT-PCR (Real-time polymerase chain reaction جداسازي گرديد. اين توالي، به داخل پلاسميد pPicZ alpha A كلون و به داخل سلول مخمر Pichia pastoris منتقل شد. سپس، اين پروتئين با تيمار سلول با استفاده از متانول (غلظت نهايي 0.5 درصد) و به مدت هاي 24، 48، 72، 96، 120، 144، 168 و 192 ساعت القا شد. در نهايت، بيان آن به روش الكتروفورز( Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE بررسي گرديد. يافته ها: با هضم آنزيمي پلاسميد نوتركيب واجد توالي كد كننده، قسمتي از EGFR ساخته شد. ميزان پروتئين بيان شده با افزايش طول مدت القا، افزايش يافت. با اين حال، پس از گذشت 3 روز از شروع القا، پروتئين هاي ترشحي ميزبان نيز در محيط كشت افزايش يافتند و بر روي ژل SDS-PAGE مشاهده شدند.نتيجه گيري: در اين مطالعه، پروتئين EGFR توليد گرديد كه مي تواند فرايند توليد آنتي بادي منوكلونال مهار كننده ي EGFR را به ميزان چشمگيري تسريع نمايد.