اندازه‌گيري آنتي‌بادي توليد شده عليه كپسول پلي ساكاريدي پلي ريبوزيل ريبيتول فسفات استخراج شده از هموفيلوس آنفلوانزاي تيپ b سويه‌ي محلي Atf2 با روش Enzymelinked Immunosorbent Assay (ELISA)

مقدمه: هموفيلوس آنفلوانزاي تيپ b (HIb يا Haemophilus influenza b) يك ارگانيزم كپسول‌دار و عامل اصلي مننژيت در كودكان در جهان مي‌باشد. آنتي‌ژن كپسول پلي‌ساكاريدي HIb يك پليمر تكراري از ريبوزيل ريبيتول فسفات و مهم‌ترين عامل ويرولانس و مسبب عفونت‌هاي بسيار در كودكان زير 5 سال به خصوص كودكان زير 2 سال مي‌باشد. كپسول پلي‌ساكاريدي كانژوگه با يك حامل پروتئيني، در جلوگيري از چنين عفونت‌هايي بسيار مؤثر است. روش‌ها: در اين مطالعه، HIb سويه‌ي Atf2 جدا شده از يك كودك مبتلا به مننژيت، در فرمانتور حاوي محيط اصلاح شده‌ي Giolitti-Cantoni broth (GC broth) كشت داده شد. كشت حاصل، بعد از غير فعال شدن با استفاده از روش‌هاي مختلف تخليص و آنتي‌ژن پلي‌ساكاريدي (PRP يا Polyribosylribitolphosphate) تهيه شده بعد از عبور از فيلتر 25/0 ميكرومتري با توكسوئيد كزاز (TT يا Tetanus toxoid) به عنوان حامل پروتئيني كونژوگه گرديد. محصول كونژوگه، پس از عبور از ژل سفارز CL-4B جداسازي شد و به عنوان محصول كونژوگه PRP-TT مورد استفاده قرار گرفت. يافته‌ها: مقدار PRP موجود در محصول كونژوگه 402 ميكروگرم از 109 باكتري در هر ميلي‌ليتر تخليص شد. مقدار پروتئين و اسيدنوكلئيك موجود در PRP مطابق با مقدار توصيه شده توسط World Health Organization (WHO) زير 1 درصد بود. بازيافت PRP موجود در محصول كونژوگه بعد از استفاده از Sodium deoxycholate (DOC)، 58 درصد بود كه نشان دهنده‌ي مقدار بالاي اتصال PRP و پروتئين اوليه بود. پاسخ آنتي‌بادي عليه محصول كونژوگه (PRP-TT) تهيه شده در نوزاد رت با نژاد ويستار با روش Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) غير مستقيم اندازه‌گيري و بالاترين تيتر براي محصول كونژوگه نسبت به PRP استخراج شده در آزمايشگاه و PRP استاندارد خريداري شده از مؤسسه‌ي بين‌المللي استانداردهاي بيولوژي در لندن (National Institute for Biological Standards And Control يا NIBSC) به دست آمد. در تيتر آنتي‌بادي به دست آمده براي PRP تخليص شده و خريداري شده از NIBSC در غلظت برابر آنتي‌ژن و رقت 200/1 آنتي‌بادي شباهت زيادي ديده شد كه اين نشانگر خلوص PRP تهيه شده در آزمايشگاه مي‌باشد. نتيجه‌گيري: روش تخليص PRP، كونژوگاسيون و ايمني‌زايي محصول كونژوگه در مدل حيواني نوزاد رت روشي مقرون به صرفه و عملي با خلوص بالا است كه مي‌توان از آن درتوليد واكسن HIb با حجم بالا (Scale up) استفاده كرد.