شناسايي همزمان آلودگي به سالمونلا و E.coli با حضورژن هاي inv A و lam B در نمونه هاي گوشت مرغ با روش Multiplex PCR

Identification of Salmonella and E.coli with invA and lamB Genes by Multiplex PCR in Chicken Samples

سابقه و هدف سالمونلا و E.coli از مهم ترين پاتوژنهاي مواد غذايي به ويژه گوشت مرغ هستند . تشخيص سريع، اختصاصي همزمان اين پاتوژنها با شناسايي ژنهاي اختصاصي از اهميت بالايي برخوردار است. هدف اين مطالعه تشخيص همزمان سالمونلا E.coli در گوشت مرغ بر مبناي تكثير دو ژن inv A و lamB با روش Multiplex PCR بود. روش كار تعداد 100 نمونه گوشت مرغ جمعآوري شد. نمونه ها با نرمال سالين شسته شدند و بر روي محيط هاي بيوشيميايي كشت داده شدند. جدايه هاي سالمونلا و E.coli خالص سازي شدند و استخراج DNA انجام گرفت. سپس تكثير همزمان ژن هاي invA و lamB با واكنش Multiplex PCR انجام شد. يافته ها از 100 نمونه گوشت مرغ، 9 نمونه و 26 نمونه به ترتيب باكتري سالمونلا و E.coli، با تست هاي بيوشيميايي جداسازي شدند. نتايج واكنش Multiplex PCR فراواني ژن invA را در 9% و ژن lamB را در 26%، همچنين فراواني هم زمان هر دو ژن را در 1% ، نمونه ها نشان داد. نتيجه گيري در اين مطالعه نتايج واكنش Multiplex PCR كه بر اساس ژنهاي بيماريزاي اختصاصي سالمونلا و E.coli انجام شد نتايج حاصل از روش تست هاي بيوشيميايي را تاييد كرد. بنابراين مقايسه نتايج نشان داد واكنش Multiplex PCR جهت شناسايي سريع و همزمان پاتوژنهاي مواد غذايي از حساسيت بالايي برخوردار است و مي تواند به عنوان روشي قابل اعتماد در كنترل آلودگي هاي مواد غذايي مطرح باشد.

Background and objective Salmonella and Escherichia coli are the most common food pathogens bacterial especially in chicken products. Rapidly, specifically and simultaneously detection of the pathogens by identification of special genes, is important. This study aim was identification of both E.coli and Salmonella in chicken products by using multiplex PCR with lamB and invA genes amplification. Materials and methods 100 chicken samples were obtained . Samples were washed by sterile saline water and were cultured in biochemical medium. Salmonella and Escherichia coli strains were purified and DNA extraction was performed. Then amplification of both invA and lamB genes were used by multiplex PCR. Results From 100 chicken samples, 9 samples and 26 samples were isolated by biochemichal tests, Salmonella and E.coli, respectively. Multiplex PCR results showed ferequency of invA gene was 9% and for lamB gene was 26% , As also, frequency of both genes in samples were 1%. Conclusion In this study, multiplex PCR results was based on Salmonella and E. coli special virulence genes was comfirmed biochemical tests results. Therefore comparation of results showed Multiplex PCR for rapid and simultaneous detection of food pathogens has high sensitivity and can be a reliable method for controlling of food contamination.