بررسي بيان ژن پمپ افلاكس marA در سويه‌هاي باليني سالمونلا انتريتيديس مقاوم به سيپروفلوكساسين با استفاده از Real Time PCR

Investigation of marA Efflux Pump Gene Expression in Ciprofloxacin Resistant Salmonella enteritidis Clinical Strains Using Real-Time PCR

زمينه و هدف: سويه­ هاي مقاوم به سيپروفلوكساسين سالمونلا انتريتيديس يكي از مهم‌ترين عوامل عفونت‌زاي انتقال­ دهنده از راه مواد غذايي مي‌باشند، به طوري كه پمپ افلاكس marA در اين باكتري نقش بسزايي در ايجاد مقاومت به سيپروفلوكساسين دارد. هدف از اين مطالعه بررسي بيان ژن پمپ افلاكس marA در سويه ‌هاي باليني سالمونلا انتريتيديس مقاوم به سيپروفلوكساسين با استفاده از روش Real Time PCR است. مواد و روش ­ها: در اين مطالعه توصيفي-مقطعي، سويه‌هاي سالمونلا انتريتيديس از نمونه باليني مدفوع با استفاده از روش‌هاي ميكروبي جداسازي شد و مقاومت آنتي‌بيوتيكي سويه ‌هاي مقاوم به سيپروفلوكساسين با روش ديسك ديفيوژن بررسي شد. سپس وجود پمپ افلاكس marA در سويه باليني سالمونلا انتريتيديس مقاوم و حدواسط به سيپروفلوكساسين با روش كارت ويل و PCR بررسي شد. هم چنين بيان ژن marA در سويه­ هاي سالمونلا انتريتيديس با استفاده از روش Real Time PCR مورد بررسي قرار گرفت. در انتها، نتايج اين مطالعه با استفاده از نرم افزار SPSS نسخه 21 و روش آماري آناليز واريانس يك طرفه (One-way ANNOVA) تحليل گرديد. يافته‌ها: از ميان 1200 نمونه باليني مدفوع، 60 نمونه سالمونلا انتريتيديس جداسازي شد كه بيشترين مقاومت مربوط به سيپروفلوكساسين 9 سويه (15%) و 11 سويه حد واسط (18%) و كمترين مقاومت به ايمي پنم وكلرامفنيكل (100%) حساس بودند. نتايج روش كارت ويل و PCR نشان داد كه از ميان 20 سويه­ مقاوم و حد واسط به سيپروفلوكساسين، تمامي آن‌ها داراي ژن پمپ افلاكس marA بودند. به دنبال آن، بيان ژن پمپ افلاكس marA در سويه­ هاي مقاوم و حد واسط به سيپروفلوكساسين افزايش معني­داري داشته است (0/05 P<). نتيجه­ گيري: بر پايه نتايج Real Time PCR، ژن پمپ افلاكس marA به عنوان يكي از عوامل مقاومت سالمونلا انتريتيديس مقاوم به سيپروفلوكساسين است

Background and Aim: Ciprofloxacin-resistant Salmonella spp. are among the most important causative agents of food-borne infections. The marA efflux pump in this bacterium plays a significant role in the development of drug resistance. The aim of this study was to investigate marA efflux pump gene expression in Ciprofloxacin resistant Salmonella enteritidis clinical strains by Real Time PCR. Materials and Methods: In this cross-sectional study, strains of Salmonella enteritidis were isolated from clinical specimens of feces using microbial methods. Antibiotic resistance of ciprofloxacin-resistant strains was evaluated by disk diffusion method. The presence of marA efflux pump in the clinical strain of Salmonella enteritidis, intermediate ciprofloxacin-resistant, was evaluated using Cart-wheel and PCR. The results of this study were analyzed using SPSS 21 software and one-way ANOVA. Results: From the 1200 fecal clinical specimens, 60 Salmonella enteritidis were isolated. The highest resistance was related to 9 strains (15%) and 11 intermediate strains (18%) ciprofloxacin. and the least resistance was related to imipenem and chloramphenicol (100% sensitive). The results of cartwheel and PCR methods showed that all strains intermediate or resistant to ciprofloxacin had a marA efflux pump. Finally, Real-Time PCR results showed a significant up-regulation of marA gene in S. enteritidis strains. Conclusion: According to the results of Real-Time PCR, it seems that the marA efflux pump gene is one of the resistance agents in ciprofloxacin-resistant Salmonella enteritidis.