جهش زايي ، كلون كردن و تعيين ترادف بازي ژن آنتي ژن ايمني بخش باسيلوس آنتراسيس در اشرشياكلي

Mutation, cloning and sequencing of Protective Antigen of Bacillus anthrasis

زمينه: آنتي‌ژن ايمني‌بخش باسيلوس‌آنتراسيس (PA) پروتئيني با خاصيت اتصال به گيرنده‌هاي سطحي سلول‌هاي بدن انسان مي‌باشد ولي در سطح سلو‌ل‌هاي سرطاني گيرنده اختصاصي uPA ) (Urokinase plasminogen activator) ايجاد مي شود كه اين پروتئين قدرت اتصال به آن‌‌‌‌را ندارد. هدف از انجام اين تحقيق تغيير جايگاه اتصال موجود بر روي PA با جهش‌زايي مستقيم مي‌باشد كه اين پروتئين فقط بتواند به سلول‌هاي سرطاني متصل گردد. مواد و روش‌ها: در طي اين تحقيق پلاسميد pMNA1 حاوي ژن PA از B.subtilis حاوي اين وكتور استخراج و با استفاده از روش واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز SOE ، جهش هدفدار بر روي ژن PA صورت پذيرفت. قطعه حاصله بطور مستقيم بر روي ناقل PTZ57R كلون و با استفاده از روش cacl2 به E.coli سويه DH5α انتقال يافت و وجود ژن و جهش بر روي آن بوسيله PCR ، هضم آنزيمي و تعيين ترادف بازي مورد بررسي قرار گرفت. يافته‌ها: قطعه ژني PA با روش PCR جداسازي و بر روي آن جهش هدفمند صورت پذيرفت. از انتقال محصول PCR جهش يافته بر روي وكتور pTZ57R پلاسميدي با اندازه 5/1 بدست آمد كه اين اندازه با روش هضم آنزيمي ثابت شد. سپس وجود ژن توسط PCR و جهش بر روي ژن توسط تعيين ترادف بازي تاييد گرديد. نتيجه‌گيري: سرطان مشهور به بيماري مرگ‌آور است. يكي از روش‌هاي درمان سرطان استفاده از توكسين‌هاي باكتريايي است لذا با استفاده از پروتئين تغيير يافته PA كه فقط به سلول‌هاي سرطاني متصل مي‌گردد، مي‌توان اميدي تازه در درمان سرطان ايجاد كرد.

Background: Protective Antigen of Bacillus anthracis (PA) is a protein that binds to receptors on OF human body cells. There is special Urokinase plasminogen activator receptor on cancer cells and PA can not bind to them. The aim of this study is modify the receptor of PA with site directed mutagenesis that the protein can only be bind to the cancer cells. Material and methods: In this study, pMNA1 plasmid that contained PA gene was extracted and site directed mutagenesis done with SOE PCR on PA gene. Mutant gene cloned on pTZ57R vector directly and transformed into E. coli DH5α with CaCl2 method. Finally exiting of the gene and mutation on PA evaluated with PCR , digestion and sequencing. Results: PA gene separated with PCR and mutated with SOE PCR. Mutated PCR product cloned on pTZ57R vector and earned 5.1 kb plasmid. Recombinant plasmid evaluated with digestion and PCR. Mutation confirmed with sequencing. Conclsion: Cancer has a deadly disease. One of the methods for treaeting cancer using bacterial toxins. Therefore Using a modified PA protein that binds to the cancer cells can create new hope for cancer treatment.