شناسايي باكتري توليد كننده بيوسورفكتانت جدا شده از خاكهاي آلوده نفتي شهرستان بروجرد

Identification of Biosurfactant-producing bacteria in petroleum contaminated soils in the city of Borujerd

سابقه و هدف: بيوسورفكتانت ماده با ارزشي است كه در صنايعي نظير نفت، پزشكي، داروسازي، آرايشي بهداشتي، غذايي و كشاورزي كاربردهاي گسترده‌اي دارد. هدف از تحقيق حاضر شناسايي باكتري‌هاي بومي توليد كننده بيوسورفكتانت موجود در خاك آلوده به ضايعات نفتي مي‌باشد. مواد و روش كار: نمونه برداري از خاكهاي آلوده نفتي اطراف شهرستان بروجرد انجام شد. پس از رقت سازي و كشت، باكتري‌هاي متفاوتي جداسازي شدند. با استفاده از آزمون‌هاي توليد بيوسورفكتانت مانند آزمون‌ هموليز خون در محيط بلاد آگار، امولسيونه كنندگي، انهدام قطره، گسترش نفت خام و مقدار تجزيه شده هيدروكربن‌هاي نفتي، باكتري‌هاي توليد كننده بيوسورفكتانت جدا شدند. قوي‌ترين گونه باكتريايي توليد كننده بيوسورفكتانت، انتخاب و در محيط كشت بوشنل هاس براث همراه با گازوئيل در انكوباتور شيكردار كشت داده شد. پس از توليد و تخليص بيوسورفكتانت از كلني مورد نظر براي شناسايي جنس و گونه باكتري، آزمون‌هاي بيوشيميايي همراه با PCR ناحيه 16 sRNA و تعيين توالي انجام شد. نتايج: با انجام آزمايشات متعدد مشخص شد باكتري، توليد كننده مقادير فراواني بيوسورفكتانت مي‌باشد. در بررسي نرم افزاري پس از تعيين توالي ثابت گرديد باكتري بيش از 97 درصد با جنس و گونه باسيلوس سوبتيليس شباهت ژنتيكي دارد. نتيجه گيري: با توجه به فراواني اين باكتري در خاك و توانايي بالاي آن در توليد بيوسورفكتانت و هم‌چنين گستردگي آلودگي‌هاي مواد نفتي در كشور مي‌توان از اين باكتري جهت رفع آلودگي‌هاي زيست محيطي استفاده نمود.

Background and Aim: Biosurfactant is a material valuable in industries such as oil, pharmaceutical, cosmetic, health food, medicine and agriculture industries. The aim of this study was to identify native biosurfactant-producing bacteria in oil contaminated soils. Materials and Methods: Sampling of petroleum contaminated soils around the city of Borujerd was done. After dilution and the cultivation, a variety of bacteria isolated. By using multiple tests of specifying biosurfactant-producing bacteria such as hemolysis test in blood agar, emulsification index measurement, destruction of drops, expansion of crude oil, the amount of petroleum hydrocarbons have been parsed biosurfactant-producing bacteria were isolated from other bacteria. The strongest biosurfactant-producing bacterial species were selected according to the screening tests and then was inoculated in Bushnell-Haas Broth medium with gasoline in a shaking incubator. After biosurfactant production and purification of the colony, to identify the genus and species of bacteria, a series of biochemical tests along with PCR of district 16 srRNA and sequencing were performed. Results: With multiple experiments it was found the bacteria produce a significant amount of biosurfactant. After DNA sequencing, in the software review was found that more than 97% genetic similarities is between the bacteria and Bacillus subtilis. Conclusions: Due to the abundance of the bacteria in soil and its ability to produce biosurfactant and extent of oil pollution in Iran, the bacteria can be easily used to eliminate environmental pollution.