توليد بيوفيلم در ميان سويه هاي استافيلوكوكوس اورئوس جدا شده از افراد سالم

Biofilm Production among Staphylococcus aureus Strains Isolated from Healthy People

سابقه و هدف: استافيلوكوكوس اورئوس از جمله باكتريهاي بيماري زا در انسان به شمار ميرود كه قابليت ايجاد طيف وسيعي از بيماريها دارد. همانند استافيلوكوكوس اپيدرمايديس استافيلوكوكوس اورئوس نيز به عنوان عامل مهمي در ايجاد بيوفيلم در بيماران حائز اهميت است. اين مطالعه با هدف تعيين توانايي توليد بيوفيلم و الگوي مقاومتي سويه هاي استافيلوكوكوس اورئوس جدا شده از افراد سالم در طي سالهاي 1393-1392به انجام رسيده است. روش كار: در اين مطالعه 200فرد سالم انتخاب گرديدند. با استفاده از سوآپ استريل نمونه گيري از ناحيه بازو، ساعد و زيربغل اين افراد انجام گرفت و سوآپ ها به محيط تايوگليكولات براث انتقال داده شدند. سپس نمونه ها بر روي محيط مانيتول سالت آگار كشت شده و شناسايي سويها تا حد گونه با استفاده از آزمونهاي بيوشيميايي و آزمون PCRبا استفاده از پرايمرهاي اختصاصي انجام گرفت. جهت تعيين توليد بيوفيلم از روش كيفي كنگورد آگار و كمي ميكروتيتر پليت استفاده گرديد و حضور ژنهاي icaAو icaDبا استفاده از pCRمشخص گرديد. الگوي مقاومت آنتي بيوتيكي سويه ها به روش ديسك ديفيوژن نسبت به 16 آنتي¬بيوتيك انجام گرفت، همچنين حداقل غلظت مهار كننده آنها نسبت به آنتي بيوتيكهاي اگزاسيلين و ونكومايسين به روش تعيينClinical Laboratory and Standard Institute (CLSI) با استفاده از توصيه هايbroth micro-dilution گرديد. پروفاژ تايپ هاي مختلف با استفاده از آزمون Multiplex-PCRشناسايي شدند . يافته ها: در مجموع 79سويه استافيلوكوكوس اورئوس از افراد سالم جدا گرديد كه 53سويه به عنوان سويه هاي مولد بيوفيلم و 26 سويه نيز به عنوان بيوفيلم منفي شناسايي شدند. در تماي 53سويه مورد نظر هر دو ژن icaAو icaDشناسايي شدند. تمامي 79 سويه نسبت به پني سيلين مقاوم بودند و بيشترين مقاومت نسبت به آنتي بيوتيك هاي اريترومايسين، سيپروفلوكساسين، آميكاسين، كانامايسين، توبرامايسين، تتراسايكلين و كليندامايسين مشاهده شد. هيچ كدام از سويه ها نسبت به ونكومايسين، لينزولايد و سينرسيد مقاومتي نشان ندادند. در مجموع 5پروفاژ تايپ و 3الگوي پروفاژي در ميان سويه ها شناسايي گرديد. نتيجه گيري: شيوع سويه هاي استافيلوكوكوس اورئوس مقاوم به متي سيلين مولد بيوفيلم و واجد مقاومت نسبت به طيف وسيعي از آنتي يوتيك ها در ميان افراد سالم نشان دهنده كلونيزه شدن اين افراد با سويه هاي بيمارستاني است. شيوع چنين سويه هايي كه با توجه به الگوي پروفاژي ميتوانند رمزكننده طيف وسيعي از عوامل حدت در اين سويه ها باشند يك خطر جدي براي سلامت جامعه به شمار مي رود.

Background an‎d Objective Staphylococcus aureus now is well documented as a nosocomial pathogen causing a variety of infections in human. In addition to Staphylococcus epidermidis, S. aureus is also known as the causative agent of biofilm formation among patients. The aim of this study was to analyze the biofilm formation and antibiotic resistance pattern of S. aureus strains isolated from healthy people during 2013-2014. Materials an‎d Methods Totally 200 healthy people were selected and sampling was carried out from arm, armpit and axillary area using sterile swaps. Swaps were transferred to thiogylcollate broth and then cultured on mannitol salt agar plates. Isolates were identified at the species level using biochemical tests and species specific primers. Potential of biofilm formation of strains was measured using congo red agar plates and microtiter plate. Genes involved in biofilm formation, icaA and icaD, was detected using PCR. Susceptibility to 16 antibiotics was determined using disc diffusion method according to guidelines of Clinical Laboratory and Standard institute (CLSI). Minimum inhibitory concentration (MIC) of oxacillin and vancomycin in MRSA isolates were also detected using broth micro-dilution assay according to CLSI recommendation. Primers for identification of 6 classes of prophages were used in a Multiplex-PCR assay Results Totally 79 S. aureus strains were isolated from healthy peoples. Amongst these, 56 and 23 strains were positive and negative for biofilm formation, respectively. icaA and icaD genes were detected in 100% of strains. All isolates were resistant to penicillin and resistance to erythromycin, ciprofloxacin, amikacin, kanamycin, tobramycin, tetracycline and clindamycin was high. None of the isolates showed resistance to vancomycin, synercid and lynezolid. Five different prophage types and 3 prophage patterns were detected. Conclusion Prevalence of biofilm producing multi drug resistant S. aureus isolates among healthy people indicating their colonization with hospital strains. Prevalence of such strains with diverse prophage types encoding broad spectrum of virulence factors, is an urgent for public health.