فعاليت پپتيد ضد ميكروبي مليتين تخليص شده از زهر زنبور عسل به روش HPLCفاز معكوس بر سويه هاي استافيلوكوكوس اورئوس جدا شده از بيماران دچار عفونت سوختگي

Antimicrobial Activity of Purified Melittin from Honey Bee Venom by Reverse Phase HPLC Against Nosocomial Strains of Staphylococcus aureus Isolated from Burn Infection patients

سابقه و هدف: استافيلوكوكوس اورئوس يكي از عوامل مهم در ايجاد عفونت هاي سوختگي بشمار مي رود. امروزه مقاومت به آنتي بيوتيك ها به دليل جهش هاي ژنتيكي، در حال افزايش مي باشد. هدف مطالعه حاضر، بررسي اثر آنتي باكتريال پپتيد مليتين جدا شده از زهر زنبور عسل ايراني بر سويه هاي استافيلوكوكوس اورئوس جدا شده از عفونت سوختگي انسان در شرايط in vitroبود. روش كار: در اين مطالعه 50سويه استافيلوكوكوس اورئوس از بيماران دچار عفونت سوختگي از مركز آموزشي درماني شهيد مطهري تهران، در طي 8ماه جمع آوري گرديد. مليتين با روش گراديانت خطي توسط دستگاه HPLCفاز معكوس از زهر زنبور عسل استخراج گرديد. MICو MBCمليتين و ونكومايسين با استفاده از روش Microdilution Brothبا رعايت اصول CLSIتعيين شد. يافته ها: حدود 22پيك در كروماتوگرام زهر قابل تشخيص بود. سطح زير منحني مربوط به مليتين تقريبا %86/9از مساحت كل فراكشن ها را تشكيل داده بود. طبق نتايج الكتروفورز، وزن مولكولي مليتين حدود 2/8كيلودالتون برآورد گرديد. ،MIC90 ، MIC50 MBC50و MBC90همچنين نسبت MIC/MBCمليتين به ترتيب 1/1 ،4/35 ،1/1و 8/7 ،0/7ميكروگرم بدست آمد. ، MIC50 MBC50 ،MIC90و MBC90همچنين نسبت MIC/MBCونكومايسين به ترتيب 1 ،16 ، 3 و 16 ، 0/7 ميكروگرم بدست آمد. نتيجه گيري: رشد تمام سويه هاي بيمارستاني استافيلوكوكوس اورئوس توسط مليتين مهار گرديد. با توجه به نتايج بدست آمده مشخص شد كه قدرت مهاري و كشندگي مليتين دو برابر ونكومايسين مي باشد. نسبت MIC/MBCمناسب مليتين، نشان داد كه اين پپتيد در صورت تبديل شدن يه يك آنتي بيوتيك، شاخص استاندارد لازم را دارا مي باشد. با توجه به اثر ضد باكتري مليتين در مقدار بسيار كم، در صورت كاربردي شدن آن در آينده، عوارض جانبي كمي خواهد داشت. با توجه به اثر قدرتمند مليتين، ممكن است مدت زمان درمان نيز كاهش يافته و متعاقب آن، هزينه هاي درماني نيز كاهش يابد.

Background an‎d Objective Staphylococcus aureus is one of the most important causes of burn infections. Nowadays, resistance to antibiotics is frequently reported due to new mutation in related genes. This study aimed to investigate the in vitro antimicrobial effect of melittin peptide isolated from Persian Honey Bee venom on S. aureus strains isolated from burn infection. Materials an‎d Methods In this study, fifty S. aureus strains were collected from burn infections during 8 months at Shahid Motahari Hospital in Tehran. Melittin was purified from bee venom by reverse phase HPLC using a linear gradient protocol. MIC and MBC Melittin and the Vancomycin determined with the use of Microdilution Broth and CLSI principles Result About 22 peaks were detected in chromatogram. Surface area for melittin approximately calculated as 68.9% comparing to the total surface area. According to electrophoresis results the molecular weight of melittin was estimated as 2.8 kDa. MIC50, MIC90, MBC50, MBC90 and also MIC/MBC for Melittin were determined at 1.1, 4.35, 1.1, and 8.7 µg, and 0.86 respectively. MIC50, MIC90, MBC50, MBC90 and also MIC/MBC for Vancomycin was determined at 1, 16, 3, 16 µg, and 0.7 respectively. Conclusions Melittin inhibited the growth of all clinical strains of S. aureus. According to the results, it was found that inhibition and lethality power of melittin was two folds greater than vancomycin. Good ratio in MIC/MBC for melittin showed that this peptide has the necessary standard index to becoming an antibiotic in future. As melittin induced its antibacterial activity in very small amounts, If melittin will become an antibiotic in future, its complication would be low. Because of powerful effect of melittin, the duration of treatment and also medical expenses would be reduced subsequently.