وجود اشكال متفاوت آماستيگوت هاي ليشمانيا ميجر با تنوع ژنتيكي پايين در افراد مبتلا به ليشمانيوز جلدي در استان خوزستان

Various Morphologic Shapes of Leishmania major Amastigotes with low Genetic Structure among People Afflicted with Zoonotic Cutaneous Leishmaniasis in Khuzestan Province

سابقه و هدف: ليشمانيوز جلدي به دليل داشتن اشكال پلي مورفيك آماستيگوت با دامنه ژنتيكي مختلف داراي فنوتيپ هاي مختلفي مي باشد. تنوع مولكولي ليشمانيا ميجر و تغييرات مورفولوژيكي آن در ميان محققان يك موضوع بحث برانگيز شده است. در اين مطالعه جنبه هاي اشكال پلي مورفيك آماستيگوت در تظاهرات باليني همراه با تغيرات ژنتيكي انگل در بيماران مشكوك به ليشمانيوز جلدي در استان خوزستان ارزيابي شد. روش كار: از 315 بيمار مشكوك طي سالهاي 1393 - 1391 نمونه برداري، تهيه اسمير و رنگ آميزي صورت گرفت. پس از استخراج DNA، محصولات PCR حاصل از ژن هاي TS - rDNA و Cyt b و Microsatellite با آنزيم اندونوكلئاز BsuRI طي فرايند RFLP هضم و پس از تعيين توالي گونه هاي مختلف ليشمانيا با آناليز مولكولي شناسايي شدند يافته ها: ليشمانيا تروپيكا و ليشمانيا ميجر در بيماران داراي آماستيگوت رايج (بيضي يا گرد) با سايز 2-4 ميكرومتر در هر زخم خشك، مرطوب يا ميكس كلاسيكي شناسايي شدند. در حاليكه اشكال نغير رايج (دوكي، گلابي يا سيگاري شكل) در زخم هاي نغير كلاسيكي مرطوب با بيشتر از 4 ميكرومتر مشاهده شد. تعيين توالي يابي سكانس هاي Cytb و ITS-rDNA ليشمانيا ميجر تنوع ژنتيكي پايين ( 0/05

Background an‎d Objective Tegumentary leishmaniasis has been implicated in many types of different phenotypes due to diverse genetic extent with polymorphic amastigote shapes. Molecular diversity and morphological changes of Leishmania major (L. major) have turned into a controversial issue among researchers. This investigation revealed the features of amastigote polymorphic shapes in clinical manifestations of suspected patients to zoonotic cutaneous leishmaniasis (ZCL) in the direction of genetic variation in Khuzestan province. Materials an‎d Method Of 315 suspected patients, sampling, smear preparation and staining were carried out during 2012-2014. After DNA extraction, the PCR products were digested with BsuRI endonuclease enzyme in the process of RFLP by targeting ITS-rDNA, Cyt b and Microsatellite genes. Results L. major and L. tropica were the parasites identified in patients having regular amastigote's shapes (oval or round) with a size of 2-4 μm in each of dry, wet and classical mixed lesions. Whereas, irregular shapes (spindle, pear or cigarette) were observed in non-classical wet lesions with more than 4 μm. Sequencing of ITS-rDNA and Cyt b genes of L. major demonstrated low molecular variation (P >0.05) except for one common haplotype (GenBank access no. EF413075) Conclusion On the basis of present findings, there is no significant correlation between phenotypic and genotypic features of L. major isolates. This study is considered as the first exhaustive report to incriminate morphometric shapes of L. major amastigotes concerning their relevance with various clinical appearances and genotypic characteristics.